小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞

运用胶原酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞组织中分离纯化目标细胞，经 Percoll 密度梯度离心去除杂细胞后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用含多种添加剂的专用培养基维持培养；通过流式细胞术分析表面标志物表达谱，免疫荧光染色验证特异性蛋白表达，并结合功能实验（如分泌功能检测、信号通路分析）综合鉴定细胞类型。

产品名称：小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞

英文名称： Mouse Placental Chorionic Trophoblast Cells

组织来源： 胎盘组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞采用胰蛋白酶-DNA酶联合消化法结合密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞经Cytokeratin-7免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，酒精消毒冻存管外壁，移入超净工作台。

稀释冻存悬液：无菌将冻存管细胞悬液转移至装有预热滋养层细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂。

离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸弃全部上清液体，留存管底细胞沉淀。

重悬制备细胞悬液：加入胎盘绒毛膜滋养层细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，滋养层细胞容易抱团，充分轻柔打散。

计数铺板接种：取样台盼蓝染色计数活细胞，按照实验密度接种培养板，十字晃动培养器皿，均匀铺散细胞。

恒温孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，减少挪动培养板，利于细胞贴壁伸展。

换液与功能实验准备：镜检细胞形态，弃旧培养基更换新鲜培养基；细胞状态稳定后，开展侵袭、分泌功能相关体外研究。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.细胞冻存后复苏需快速 thawing，37度水浴快速解冻后迅速加入预温培养基稀释DMSO。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。