小鼠视网膜微血管内皮细胞

小鼠视网膜微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从C57BL/6小鼠的视网膜微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：小鼠视网膜微血管内皮细胞

英文名称： Mouse Retinal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 视网膜组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠视网膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠视网膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠视网膜微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠视网膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠视网膜微血管内皮细胞冻存管，37℃水浴快速摇晃融化冻存液，冻存液融化完毕，75% 酒精消毒管壁，移入超净台。

稀释冻存细胞悬液：冻存管细胞悬液转移至装有预热微血管内皮细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸除全部上清液，留存管底细胞沉淀。

轻柔重悬细胞：加入视网膜微血管内皮细胞完全培养基，温和吹打沉淀，打散细胞团，微血管内皮细胞耐受剪切力差，操作轻柔。

计数铺板接种：取样计数活细胞，接种明胶包被的培养板，按照实验密度铺板，十字晃动培养器皿，细胞均匀分布。

培养箱孵育贴壁：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，减少挪动，便于内皮细胞贴壁伸展。

换液与功能检测准备：镜检梭形内皮细胞形态，弃旧培养基更换新鲜培养基；细胞汇合后，用于血管生成、视网膜血管病变体外模型实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。