小鼠视网膜Muller细胞

小鼠视网膜Muller细胞

从C57BL/6小鼠视网膜Muller细胞脑组织标本经机械分离与胶原酶/DNAse 联合消化获取单细胞悬液，通过 37°C 预贴壁去除贴壁细胞（星形胶质细胞/成纤维细胞）后，将悬浮细胞转种于 PLL 包被培养皿中，使用含 B27、NGF 及 CNTF 的 Neurobasal 培养基培养小胶质细胞/神经胶质细胞；通过流式细胞术检测 CD11b/c、CR3（Mac-1）、MHC-II 表达，免疫荧光显示 Iba1/GFAP 阳性，并结合 LPS 刺激后细胞因子释放实验验证免疫应答功能。

产品名称：小鼠视网膜Muller细胞

英文名称： Mouse Retinal Muller Cells

组织来源： 视网膜组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠视网膜Muller细胞采用胶原酶消化法和胰蛋白酶反复消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠视网膜Muller细胞经GS免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠视网膜Muller细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠视网膜Muller细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠视网膜 Muller 细胞冻存管，置于 37℃水浴快速融化冻存液，冻存液融化完毕，75% 酒精擦拭冻存管外壁，移入超净台。

稀释冻存细胞悬液：把冻存管内细胞悬液转移至预温 Muller 细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，降低 DMSO 对视网膜细胞的毒性。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，缓慢吸除上清液，不要扰动脆弱的细胞沉淀。

轻柔重悬细胞沉淀：加入视网膜 Muller 细胞专用完全培养基，温和吹打沉淀，打散细胞团，避免强力吹打造成细胞裂解死亡。

活细胞计数铺板：取样计数活细胞，按照实验需求密度接种培养板，十字缓慢晃动培养器皿，让细胞均匀分布。

培养箱孵育贴壁：平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，减少培养箱开关频次，维持稳定微环境。

换液与功能实验准备：镜检观察 Muller 细胞形态，弃旧培养基更换新鲜培养基；细胞生长状态良好，可开展视网膜损伤、胶质反应相关体外实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞接种密度对实验结果影响显著，建议根据实验目的优化接种密度参数。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。