小鼠肾小球上皮细胞

小鼠肾小球上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从C57BL/6小鼠靶组织中分离肾小球上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：小鼠肾小球上皮细胞

英文名称： Mouse Glomerular Epithelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肾小球上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肾小球上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠肾小球上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肾小球上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠肾小球上皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，融化完成，75% 酒精擦拭冻存管外壁，送入超净工作台。

稀释冻存悬液：无菌操作将冻存管全部细胞悬液转移至预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心移除全部上清液体，不要扰动管底细胞沉淀。

重悬打散细胞：加入肾小球上皮细胞完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，打散细胞团块，制备均匀单细胞悬液，减少机械剪切损伤上皮细胞。

计数铺板接种：取样台盼蓝染色计数活细胞，按照实验要求密度接种于培养板，十字晃动培养板，使细胞均匀铺于板底。

恒温孵育贴壁：放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，静置培养，减少外界扰动，促进细胞贴壁生长。

换液及后续实验准备：24h 后镜检细胞形态，弃除旧培养基更换新鲜完全培养基；持续观察细胞生长，汇合度达到 80%，即可开展药物干预、损伤模型构建实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞接种密度对实验结果影响显著，建议根据实验目的优化接种密度参数。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。