小鼠肾实质细胞

小鼠肾实质细胞

运用胶原酶消化法从C57BL/6小鼠肾实质细胞组织中分离目标细胞群体，经 Percoll 梯度离心纯化后接种于纤连蛋白包被培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术和免疫荧光双重分析表面标志物表达谱，结合功能实验验证细胞生物学特性。

产品名称：小鼠肾实质细胞

英文名称： Mouse Renal Parenchymal Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肾实质细胞采用胶原酶-胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肾实质细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠肾实质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肾实质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：从液氮罐取出小鼠肾实质细胞冻存管，立即放入 37℃水浴快速融解，不断晃动冻存管加速融化，冻存液完全融化后，外壁喷洒 75% 乙醇消毒，转移进超净工作台。

稀释冻存悬液：无菌条件下把冻存管内全部细胞悬液转移至预加完全培养基的 15mL 离心管中，缓慢吹打混匀，降低冻存保护剂 DMSO 对细胞的毒性损伤。

离心收集细胞沉淀：配平离心管，1000r/min 离心 5min，离心结束后拿取离心管动作轻柔，防止沉淀震荡散开，使用无菌吸管彻底吸除全部上清液体。

制备单细胞悬液：向离心管添加小鼠肾实质细胞专用完全培养基，对底部细胞沉淀进行轻柔吹打，充分打散团聚细胞，制备分散良好的细胞悬液，吹打力度不宜过大，防止细胞破碎。

计数接种培养器皿：取样进行细胞活率计数，依据实验方案调整接种细胞密度，将细胞悬液加到培养瓶 / 培养板，采用十字摇晃法混匀细胞，保证细胞均匀铺在器皿底面。

培养箱静置贴壁：把细胞培养器皿平稳放置于 37℃，5% CO₂细胞培养箱中静置孵育，静置 24 小时，此阶段避免挪动、晃动培养板，保障细胞充分贴壁生长。

换液与状态监测：24h 后显微镜观察细胞贴壁与形态，移除旧培养基，更换新鲜完全培养基；之后定时镜检，观察肾实质细胞多边形形态，细胞汇合至 80% 左右即可用于后续体外实验。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.使用纤维连接蛋白(10ug/ml)包被培养器皿可显著改善内皮细胞贴壁速度和铺展形态。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。