产品名称 | 小鼠肾皮质上皮细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Mouse Renal Cortical Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2927 |
方法简介 实验室分离的小鼠肾皮质上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠肾皮质上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠肾皮质上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肾皮质上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠类风湿因子IgG抗体(RF-IgG)elisa试剂盒 | NCI-H2444非小细胞肺癌 |
大鼠类风湿因子(RF)elisa试剂盒 | 兔肾上腺皮质细胞 |
大鼠抵抗素(Resistin)elisa试剂盒 | 兔肾小球系膜细胞 |
大鼠抵抗素样分子β(RELM-β)elisa试剂盒 | 兔乳腺上皮细胞 |
大鼠白细胞介素34(IL-34)elisa试剂盒 | 人结肠癌紫杉醇耐药株HCT-15+Taxol(STR鉴定正确) |
大鼠白细胞介素36Ra(IL-36Ra)elisa试剂盒 | 兔心室心肌细胞 |
猪肌肉生长抑制素;肌抑素（MSTN）elisa试剂盒 | 兔原代肺巨噬细胞 |
C6大鼠脑胶质瘤细胞专用培养基 | CTTNBP2NL基因过表达细胞株 |
MEF(丝裂霉素C处理)小鼠胚胎成纤维细胞专用培养基 | H6PD基因过表达细胞株 |
兔原代脑动脉平滑肌细胞专用培养基 | GPR173基因过表达细胞株 |
CCD-18Co细胞专用培养基 | SEMA3D基因过表达细胞株 |
人原代肺动脉平滑肌细胞专用培养基 | FOXL2基因过表达细胞株 |
小鼠肾皮质上皮细胞大鼠原代成骨细胞专用培养基 | AADAC基因过表达细胞株 |
CHL细胞专用培养基 | DACH2基因过表达细胞株 |
无菌前期准备：超净台紫外灭菌 30min，准备小鼠肾皮质上皮细胞专用完全培养基、无菌 PBS、上皮温和消化液、基质胶包被培养瓶、无菌离心管；37℃水浴预热试剂，肾皮质上皮贴壁能力有限，培养瓶提前基质胶包被，全部器具酒精消毒移入超净台。
冻存细胞复苏融化：液氮取出冻存管，37℃水浴快速摇晃，1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁酒精消杀移入超净台，细胞悬液转移至装有肾皮质上皮培养基的离心管，轻柔颠倒混匀稀释 DMSO。
离心富集细胞沉淀：离心管配平，950r/min 离心 6min；离心完成，超净台缓慢吸弃上清，上皮沉淀松散，操作轻柔，避免细胞丢失。
重悬计数接种包被培养瓶：加入预热肾皮质上皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀制备单细胞悬液；细胞计数，调整接种密度，接种基质胶预先包被完成的培养瓶。
CO₂培养箱静置孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育 24‑48h，减少移动培养瓶，等待多边形肾皮质上皮细胞粘附生长。
轻柔换液去除杂质：48h 后显微镜观察细胞贴壁，弃旧培养基，PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞层 1 次，禁止强力冲涮；补入新鲜预热上皮完全培养基放回培养箱，每 2‑3 天更换培养基。
温和消化传代扩增：细胞汇合度 75%‑80% 进行传代；弃培养基，PBS 轻洗细胞层，加入上皮温和消化酶 37℃孵育；镜下细胞收缩、间隙增大，立刻加完全培养基终止酶反应；轻柔吹打收集细胞悬液，离心重悬接种基质胶包被新瓶，用于肾脏损伤、药物肾毒性体外评价实验。
