小鼠肾动脉内皮细胞

小鼠肾动脉内皮细胞

从C57BL/6小鼠肾动脉内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：小鼠肾动脉内皮细胞

英文名称： Mouse Renal Artery Endothelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肾动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肾动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠肾动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肾动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌耗材试剂准备：超净台紫外照射灭菌 30min，准备小鼠肾动脉内皮细胞专用内皮完全培养基、无菌 PBS、内皮细胞温和消化液、明胶包被培养瓶、无菌离心管；37℃水浴预热试剂，内皮细胞贴壁依赖包被，培养瓶提前明胶包被，全部器具酒精消毒进台。

冻存细胞复苏融化：液氮取出冻存管，37℃水浴快速晃动，1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁酒精消杀移入超净台，细胞悬液转移至装有内皮完全培养基的离心管，轻柔混匀稀释 DMSO 毒性。

离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min；离心完毕取出，超净台缓慢吸弃全部上清液，保留管底内皮细胞沉淀。

重悬计数接种包被器皿：加入预热肾动脉内皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀制备单细胞悬液；细胞计数，调整接种密度，接种至明胶包被完成的培养瓶。

恒温孵育促进内皮贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，尽量不挪动培养瓶，等待多边形内皮细胞贴壁生长。

轻柔换液维护细胞状态：48h 后显微镜观察细胞，弃旧培养基，PBS 缓冲液缓慢冲洗细胞层 1 次，内皮细胞容易脱落，不可大力冲刷；补入新鲜预热内皮完全培养基放回培养箱，每 2‑3 天换液。

温和消化传代扩增：细胞汇合度 75%‑80% 执行传代；弃培养基，PBS 轻洗，加入内皮温和消化酶 37℃孵育；镜下细胞回缩间隙变大，立刻加入完全培养基终止酶解；轻柔吹打收集细胞悬液，离心重悬接种明胶包被新培养瓶，用于血管功能、血管损伤相关实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。