产品名称 | 小鼠肾成纤维细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Mouse Renal Fibroblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2937 |
方法简介 实验室分离的小鼠肾成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠肾成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠肾成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肾成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠Ras同源基因家族成员A(RhoA)elisa试剂盒 | NCI-H2085非小细胞肺癌 |
大鼠RF酰胺相关肽-3(RFRP-3)elisa试剂盒 | 兔输尿管成纤维细胞 |
大鼠类风湿因子IgA抗体(RF-IgA)elisa试剂盒 | 兔肝间质细胞 |
大鼠核内激活受体α(rev-erbα)elisa试剂盒 | 小鼠甲状腺滤泡上皮细胞 |
大鼠白细胞介素3(IL-3)elisa试剂盒 | 小鼠肾小球足细胞MPC-5（种属鉴定） |
大鼠白细胞介素32(IL-32)elisa试剂盒 | 人海绵体平滑肌细胞 |
猪肌酸转运体蛋白（CRT）elisa试剂盒 | 小鼠原代结肠黏膜上皮细胞 |
BRL大鼠肝细胞专用培养基 | BCKDHB基因过表达细胞株 |
MC3T3-E1subclone 14小鼠颅顶前骨亚克隆14细胞专用培养基 | CYP4X1基因过表达细胞株 |
人原代滑膜间充质干细胞专用培养基 | FCRL3基因过表达细胞株 |
Caski 细胞专用培养基 | KIF3A基因过表达细胞株 |
人原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | GARIN1B基因过表达细胞株 |
小鼠肾成纤维细胞大鼠原代肠巨噬细胞专用培养基 | CHRNG基因过表达细胞株 |
CFSC-8B细胞专用培养基 | C10orf67基因过表达细胞株 |
无菌前期准备工作：超净工作台紫外消毒 30min，准备小鼠肾成纤维细胞完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液、无菌离心管、T25 培养瓶；37℃水浴回温全部试剂，酒精擦拭耗材后移入超净台，严格把控无菌条件。
冻存细胞复苏融化：液氮罐取出冻存管，37℃水浴来回晃动，1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁喷洒酒精消毒移入操作台，细胞悬液转移至装有肾成纤维细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀。
离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000r/min 离心 5min；离心结束取出，超净台内吸弃全部上层上清，留存管底细胞沉淀。
重悬计数接种培养瓶：加入预热肾成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀制备单细胞悬液；细胞计数，调整接种密度，将细胞悬液接种到无菌 T25 培养瓶，摇匀细胞分布。
CO₂培养箱孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，等待肾成纤维细胞贴壁，伸展梭形形态。
换液清除悬浮死细胞碎片：24h 后取出培养瓶，显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，PBS 缓冲液冲洗细胞层 1‑2 次，去除悬浮碎片；加入新鲜预热完全培养基放回培养箱，每 2‑3 天换液一次。
细胞汇合后传代扩增：镜下细胞汇合度 80%‑85% 开展传代；弃培养基，PBS 冲洗细胞层两次，加入胰酶消化液，37℃短暂消化；镜下细胞回缩变圆，加入含血清培养基终止消化；吹打收集细胞悬液，离心重悬分瓶，用于肾纤维化相关体外模型实验。
