产品名称 | 小鼠神经小胶质细胞 | 组织来源 | 脑组织 |
英文名称 | Mouse Microglial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3036 |
方法简介 实验室分离的小鼠神经小胶质细胞采用酶消化法结合差速贴壁法，在培养基营养缺失数天后经摇床震荡收集脱落细胞制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠神经小胶质细胞经CD11b免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠神经小胶质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 利多卡因（12 mM）
小鼠神经小胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取脑组织或脊髓组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、EGF、FGF-b、PDGF-AA
分离纯化步骤
取实验动物脑组织或脊髓组织，用预冷PBS冲洗去除血液
去除脑膜和血管组织，将目标区域剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化30分钟
过滤后300g离心8分钟收集细胞，重悬于含EGF和FGF-b的培养基中
采用磁珠分选或差速培养法富集目标胶质细胞类型
原代培养要点
胶质细胞(星形胶质细胞/少突胶质细胞/小胶质细胞)培养条件略有差异
星形胶质细胞：DMEM/F12+10%FBS，37度、5% CO2，细胞呈多角形贴壁生长
少突胶质细胞：需PDGF-AA维持增殖，分化期添加T3、甲状腺素促进成熟
小胶质细胞：采用振荡分选法从混合胶质细胞中分离，悬浮或弱贴壁生长
常见问题优化
胶质细胞交叉污染：采用免疫磁珠分选可提高纯度至90%以上
少突胶质细胞分化率低：添加C57条件培养基或IBMX可促进少突胶质细胞成熟
小胶质细胞活化：避免过度培养，原代培养5代以内保持静息态表型
大鼠受体相互作用蛋白1(RIP1)elisa试剂盒 | NCI-H1792非小细胞肺癌 |
大鼠Ras同源基因家族成员A(RhoA)elisa试剂盒 | 兔肾足细胞 |
大鼠RGD三肽(RGD)elisa试剂盒 | 兔小肠隐窝上皮细胞 |
大鼠类风湿因子IgA抗体(RF-IgA)elisa试剂盒 | 小鼠腮腺细胞 |
大鼠白细胞介素25(IL-25)elisa试剂盒 | 小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株G422（种属鉴定） |
大鼠白细胞介素2β(IL-2β)elisa试剂盒 | 小鼠肌腱干细胞 |
猪基质金属蛋白酶1（MMP-1）elisa试剂盒 | 小鼠原代淋巴管内皮细胞 |
AR42J大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞专用培养基 | BAAT基因过表达细胞株 |
MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞专用培养基 | ZNF618基因过表达细胞株 |
小鼠原代肠道干细胞专用培养基 | G6PC1基因过表达细胞株 |
Capan-1细胞专用培养基 | GIMAP2基因过表达细胞株 |
人原代肺微血管周细胞专用培养基 | SLC7A14基因过表达细胞株 |
小鼠神经小胶质细胞大鼠原代肠道干细胞专用培养基 | FAM181B基因过表达细胞株 |
CEM/C1细胞专用培养基 | IQCE基因过表达细胞株 |
无菌试剂耗材准备：超净工作台紫外消毒 30min，准备小鼠小胶质细胞完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液、无菌离心管、培养瓶；37℃水浴回温试剂，小胶质细胞属于免疫类神经细胞，极易被刺激活化，操作动作轻柔，避免机械刺激，全部器具酒精消毒进台。
冻存小胶质细胞复苏融化：液氮罐取出冻存管，置于 37℃水浴快速晃动，1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁酒精消杀移入超净台，细胞悬液转移至装有小胶质细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀。
离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000r/min 离心 5min；离心完毕取出，超净台内吸除全部上层上清液，留存管底细胞沉淀。
重悬计数接种培养瓶：加入预热小胶质细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀制备单细胞悬液；细胞计数，调整接种密度，接种于无菌细胞培养瓶，摇匀细胞。
培养箱孵育贴壁生长：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，小胶质细胞贴壁，注意不要磕碰培养瓶，避免意外激活细胞。
换液清除死细胞碎片：48h 后显微镜观察细胞形态，静息小胶质细胞胞体小、有分支突起；弃旧培养基，PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞层 1‑2 次，去除悬浮碎片；补入新鲜预热完全培养基放回培养箱，每 2‑3 天换液。
传代消化扩增，避免过度刺激：细胞汇合度 80% 进行传代，弃培养基，PBS 轻洗，加入胰酶消化液短暂消化；镜下细胞变圆，立刻加完全培养基终止消化；轻柔吹打收集细胞悬液，离心重悬分瓶；操作全程减少吹打力度，防止小胶质细胞提前活化，用于神经免疫、炎症模型实验。
