小鼠神经干细胞

小鼠神经干细胞

运用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠神经干细胞组织中分离间充质干细胞，经预培养去除非贴壁细胞后，选用含 10% FBS 和 2 mM L-谷氨酰胺的 DMEM/F12 培养基进行扩增；通过免疫荧光染色检测 Nanog、Oct4、Sox2 等多能性标志物表达，流式细胞术分析 CD34-、CD45-、HLA-DR- 表型，并经体外诱导分化实验（成骨/成脂/成软骨）验证多向分化潜能。

产品名称：小鼠神经干细胞

英文名称： Mouse Neural Stem Cells

组织来源： 脑组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠神经干细胞采用胰蛋白酶消化后差速贴壁，结合神经干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠神经干细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠神经干细胞完全培养基(含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 球形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： Accutase消化液或0.25%胰蛋白酶

小鼠神经干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌耗材试剂准备：超净工作台紫外消毒 30min，准备神经干细胞无血清增殖培养基、无菌 PBS、神经球温和解离酶、无菌离心管、低吸附培养板；37℃水浴回温试剂，神经干细胞悬浮形成神经球，使用低吸附培养器皿，避免提前贴壁分化，全部器具酒精消毒进台。

冻存神经干细胞复苏融化：液氮罐取出冻存管，37℃水浴快速晃动 1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁酒精消杀移入超净台，细胞悬液转移至装有神经干细胞增殖培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀稀释 DMSO。

低速离心收集细胞沉淀：离心管配平，900r/min 离心 6min；离心完成取出，超净台缓慢吸弃全部上清液，留存管底松散神经干细胞沉淀。

重悬计数接种低吸附板：加入预热神经干细胞无血清增殖培养基，轻柔吹打沉淀制备细胞悬液；细胞计数，调整低密度接种，将细胞悬液接种至低吸附细胞培养板，便于悬浮神经球生成。

培养箱孵育形成神经球：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，不要挪动培养板，培养 3‑5 天观察悬浮神经干细胞球逐步形成。

半量换液维持干细胞干性：每 2‑3 天进行半量换液，吸取一半旧培养液，补入等体积新鲜增殖培养基，不全部弃液，保护干细胞微环境，抑制自发分化。

神经球解离传代或诱导分化：神经球生长至合适大小，收集细胞悬液离心，加入温和解离酶孵育打散神经球为单细胞；离心重悬，低密度接种低吸附板继续扩增；更换分化培养基即可诱导向神经元、胶质细胞分化，开展神经发育相关实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。