小鼠腮腺细胞

小鼠腮腺细胞

基于原代组织酶消化法从C57BL/6小鼠腮腺细胞组织标本获取单细胞悬液，经密度梯度离心和免疫磁珠分选（MACS）双重纯化后，接种于 Matrigel 或胶原包被的培养表面，使用优化配方的专用培养基（含 10% FBS、特定细胞因子及添加剂）培养；通过多组学鉴定策略（免疫荧光/流式/转录组）确认细胞身份，并采用功能实验验证其生物学活性。

产品名称：小鼠腮腺细胞

英文名称： Mouse Parotid Gland Cells

组织来源： 腮腺组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠腮腺细胞采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化后差速贴壁，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠腮腺细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠腮腺细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 不建议传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠腮腺细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌前期准备：超净台紫外照射灭菌 30min，准备小鼠腮腺细胞完全培养基、无菌 PBS、温和组织消化酶、无菌离心管、培养瓶；37℃水浴回温全部试剂，腮腺属于腺体原代混合细胞，对消化条件敏感，所有器具酒精消毒移入超净台。

冻存细胞复苏融化处理：液氮取出冻存管，投入 37℃水浴快速摇晃，1‑2min 融化冻存液；冻存管外壁喷洒酒精消毒移入操作台，细胞悬液转移至装有腮腺细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀。

离心沉淀收集活细胞：离心管配平，950r/min 离心 6min；离心结束，超净台小心吸弃上层上清液，留存管底松散的腮腺细胞沉淀，枪头不要触碰沉淀。

重悬计数接种培养：加入预热腮腺细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀制备单细胞悬液；完成细胞计数，调整接种密度，将细胞悬液接种到无菌细胞培养瓶内。

CO₂培养箱孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，减少挪动，等待腮腺腺上皮、间质细胞贴壁生长。

换液清除悬浮死细胞碎片：孵育 24h 后取出，倒置显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，PBS 缓冲液轻柔冲洗细胞层 1‑2 次，去除悬浮碎片死细胞；补入新鲜预热完全培养基放回培养箱，每 2‑3 天换液一次。

传代温和消化扩增：细胞汇合度达到 75%‑80% 进行传代，弃培养基，PBS 轻洗细胞层，加入温和消化酶 37℃孵育；镜下细胞回缩变圆，立刻加入完全培养基终止消化；轻柔吹打收集细胞悬液，离心重悬分瓶，用于腺体分泌功能相关实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用含0.1mg/ml poly-D-lysine的培养板培养神经元，4度过夜包被后PBS洗涤3次方可接种细胞。

3.该细胞类型体外寿命有限，分离后需尽快进行实验分析，超过10天培养后大部分神经元会出现退行性改变。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 换液操作需极其轻柔，使用预温的培养基沿培养壁缓慢加入，避免液流冲击导致贴壁不牢的神经元脱落。