小鼠前脂肪细胞

小鼠前脂肪细胞

运用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠脂肪组织中分离成熟脂肪细胞和前脂肪细胞，经胶原酶消化后取浮层脂肪细胞和沉淀前脂肪细胞分别培养，前脂肪细胞使用 DMEM/F12 完全培养基（含 20% FBS）扩增，分化诱导使用含 0.5 mM IBMX、1 μM Dexamethasone、5 μg/mL Insulin 和 500 μM RO201724 的成脂诱导培养基处理 7-10 天；通过 Oil Red O 脂滴染色定量脂滴面积

产品名称：小鼠前脂肪细胞

英文名称： Mouse Preadipocytes

组织来源： 脂肪组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠前脂肪细胞采用胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠前脂肪细胞经成脂诱导功能验证，诱导成脂后，经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌耗材试剂准备：超净台紫外消毒 30min，准备前脂肪细胞完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液、无菌离心管、T25 培养瓶；37℃水浴预热全部试剂，前脂肪细胞后续可诱导分化为成熟脂肪细胞，全程避免污染，做好试剂预热。

冻存细胞复苏操作：液氮取出冻存管，投入 37℃水浴快速摇晃，1‑2min 融化冻存液；冻存管表面酒精消杀移入超净台，将细胞悬液转移至装有前脂肪细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂。

离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min；离心结束取出，超净台内吸弃全部上层上清液，留存管底细胞沉淀。

重悬、计数、接种：向离心管加入预热前脂肪细胞完全培养基，充分轻柔吹打沉淀，制备单细胞悬液；进行细胞计数，调整接种密度，把细胞悬液接种至细胞培养瓶，摇晃培养瓶使细胞分布均匀。

培养箱孵育贴壁生长：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，等待前脂肪细胞贴壁伸展，观察梭形前脂肪细胞形态。

定期换液清除死细胞：24h 后取出培养瓶，显微镜观察贴壁，弃旧培养基，PBS 缓冲液冲洗细胞层 1‑2 次，去除悬浮死细胞碎片；加入新鲜预热培养基放回培养箱，每 2‑3 天换液一次。

传代消化扩增（分化前传代）：细胞汇合度达到 75%‑80% 执行传代，弃培养基，PBS 冲洗细胞层，加入胰酶消化液，37℃消化；镜下细胞变圆回缩，加入含血清培养基终止消化；吹打收集全部细胞悬液，离心重悬分瓶扩增，如需诱导脂肪分化，待细胞长满后更换脂肪诱导分化培养基。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。