小鼠前列腺干细胞

小鼠前列腺干细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的前列腺干细胞来源组织（骨髓/脐带/脂肪等）中分离间充质成分，经密度梯度离心纯化单核细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 α-MEM 培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过流式细胞术检测干细胞标志物 CD90、CD44、CD105、STRO-1 表达，结合三系分化能力验证（成骨诱导 ALP 阳性/阿利新蓝染色、成脂诱导 Oil Red O 染色、成软骨诱导 Alcian Blue 染色）确认干细胞多能性。

产品名称：小鼠前列腺干细胞

英文名称： Mouse Prostate Stem Cells

组织来源： 前列腺

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠前列腺干细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过前列腺干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠前列腺干细胞经Sca-1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠前列腺干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 长梭形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠前列腺干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌耗材与试剂预准备：超净台紫外灭菌 30min，准备干细胞专用无血清完全培养基、PBS、温和消化酶、无菌离心管、培养板；37℃水浴回温全部试剂，所有耗材酒精消毒后进台，前列腺干细胞对污染、环境波动敏感度高，所有操作降低吹打力度，防止干细胞分化。

冻存细胞快速复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化冻存液，控制融化时间不超过 2min；冻存管外壁酒精消杀移入超净台，把细胞悬液转移至含有干细胞培养基的 15mL 无菌离心管，轻柔颠倒混匀，稀释冻存保护剂 DMSO。

离心纯化细胞沉淀：离心管配平，900r/min 离心 6min；离心完成后移出离心管，超净台内缓慢吸除上层上清液，切勿吸走底部干细胞沉淀，干细胞沉淀松散，吸液枪头远离管底沉淀位置。

单细胞悬液制备接种：加入小鼠前列腺干细胞无血清专用培养基，缓慢轻柔吹打沉淀，避免剧烈剪切力造成干细胞损伤分化；细胞计数，调整接种密度，干细胞适合低密度接种，将细胞悬液接种于提前包被基质胶的培养板 / 培养瓶内。

干细胞专用条件孵育：将培养容器放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，前列腺干细胞需要低扰动培养，前 48h 尽量不要挪动培养板，允许细胞粘附、形成干细胞克隆球，观察克隆形成情况。

半量换液维护干细胞干性：培养 48h 后，镜下观察克隆球生长，进行半量换液，只吸出一半旧培养基，补入同等体积预热新鲜干细胞培养基，不要全部弃除培养液，避免破坏细胞微环境；之后每 2‑3 天执行半量换液，维持细胞干性，抑制自发分化。

传代克隆解离扩增：当干细胞克隆球体积增大，达到合适规模，弃培养基，PBS 轻洗，加入温和解离消化酶，37℃短暂孵育；镜下观察克隆松散，加入干细胞培养基终止酶反应，轻柔吹打打散克隆球成单细胞；离心重悬，重新低密度接种包被基质胶的培养器皿，持续扩增，用于诱导分化或者功能实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。