小鼠前列腺成纤维细胞

小鼠前列腺成纤维细胞

从C57BL/6小鼠前列腺成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：小鼠前列腺成纤维细胞

英文名称： Mouse Prostate Fibroblasts

组织来源： 前列腺

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠前列腺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠前列腺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠前列腺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠前列腺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

实验前准备与无菌环境搭建：提前开启超净工作台紫外消毒 30min，准备无菌培养瓶、离心管、移液枪头、预温完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液、75% 医用酒精；实验器具表面喷洒酒精，全部移入超净台，水浴锅设置 37℃，培养基、消化液置于水浴充分回温，全程严格无菌操作，避免支原体、细菌污染。

细胞复苏处理：从液氮罐取出冻存的小鼠前列腺成纤维细胞冻存管，快速投入 37℃水浴，不断晃动冻存管，1‑2min 内使冻存液完全融化；冻存管外壁酒精擦拭消毒后移入超净台，用无菌移液管将细胞悬液缓慢转移至装有足量完全培养基的 15mL 离心管中，轻柔吹打混匀，降低 DMSO 对细胞的毒性损伤。

离心去除冻存保护剂：将离心管配平后放入离心机，设置转速 1000r/min，离心时间 5min；离心结束后小心取出离心管，在超净台内弃去上层全部上清液，注意不要触碰底部细胞沉淀，留存管底细胞团块。

重悬细胞与接种铺板：向离心管内加入预热好的小鼠前列腺成纤维细胞专用完全培养基，使用移液管轻柔多次吹打管底沉淀，充分打散细胞，制备均匀单细胞悬液；取样进行细胞计数，调整细胞接种密度至合适区间，按照实验需求将细胞悬液分装接种至细胞培养瓶或者多孔培养板。

细胞培养孵育：将接种完成的培养容器平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度的细胞培养箱中进行孵育培养；放入之后尽量减少频繁开关培养箱门，保证箱内温度、二氧化碳浓度稳定，静置培养 24h，让细胞充分贴壁伸展。

换液去除死细胞与杂质：孵育 24h 之后取出培养容器，显微镜下观察细胞贴壁状态，弃去旧的培养基，使用无菌 PBS 缓冲液缓慢轻柔冲洗细胞层 1‑2 次，去除悬浮死细胞、细胞碎片；加入新鲜预热完全培养基，放回培养箱继续培养，后续每 2‑3 天进行一次换液操作。

传代消化处理（细胞汇合度达标后）：当显微镜观察细胞汇合度达到 80%‑85% 时开展传代，弃培养基，PBS 冲洗细胞层 2 次，加入适量 0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液，覆盖全部细胞表面，培养箱内短暂消化；显微镜下看到细胞回缩变圆、少量细胞脱落，立刻加入含血清完全培养基终止消化；吹打瓶壁收集全部细胞悬液，离心，重悬分瓶继续扩增或者用于后续实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.平滑肌细胞体外可增殖，传代比例1:3至1:4，细胞长至80-90%融合时进行胰酶消化传代。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。