小鼠气管软骨细胞

小鼠气管软骨细胞

从C57BL/6小鼠长骨骨膜或骨组织经胶原酶 I/II 联合消化获取骨细胞，经差速贴壁纯化后接种于玻连蛋白包被的培养皿中，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过免疫荧光检测骨细胞标志物 E11/gp38、Piezo1、SOST（硬化蛋白）及 DMP1 表达，并采用共培养体系与破骨细胞前体细胞共培养验证成骨-破骨偶联信号传导功能。

产品名称：小鼠气管软骨细胞

英文名称： Mouse Tracheal Chondrocytes

组织来源： 气管组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠气管软骨细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠气管软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠气管软骨细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每3-4天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠气管软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌准备工作：超净台紫外消毒 30min，软骨细胞专用完全培养基、PBS、胰酶‑胶原酶混合消化液 37℃水浴预热，准备 T25 培养瓶，做好标记，耗材试剂外壁酒精消毒移入操作台。

冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速摇晃解冻，2min 内融化完毕，外壁酒精消毒，台内将细胞悬液转移至含完全培养基的无菌离心管中，轻轻混匀。

离心去除冻存保护剂：离心管配平，室温 1000r/min 离心 5min，小心移除上层上清液，保留管底软骨细胞沉淀。

重悬制备单细胞悬液：加入软骨细胞完全培养基，缓慢轻柔吹打沉淀，软骨细胞较脆弱，吹打力度不宜过猛，取样完成细胞计数，按合适密度接种于培养瓶。

恒温孵育贴壁：将培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置培养，气管软骨细胞贴壁速度偏慢，48h 内尽量不移动培养瓶。

换液观察细胞状态：培养 48h 后取出，显微镜观察贴壁与细胞形态，吸除旧培养基，PBS 轻柔漂洗，去除悬浮死细胞，更换新鲜预热完全培养基，放回培养箱持续培养。

传代消化处理：细胞汇合度到达 75%‑80% 即可传代，弃旧培养基，PBS 清洗 2 次，加入胶原酶‑胰酶混合消化液，37℃消化 4‑6min，镜下细胞离散，加入培养基终止消化，收集细胞离心后分瓶培养。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。