小鼠脐动脉内皮细胞

小鼠脐动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离C57BL/6小鼠脐动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：小鼠脐动脉内皮细胞

英文名称： Mouse Umbilical Artery Endothelial Cells

组织来源： 脐带组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脐动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脐动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠脐动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脐动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：脐动脉内皮细胞专用完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净台紫外灭菌 30min，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头耗材，检查冻存管完好无漏液。

水浴解冻冻存管：液氮取出冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，留少量冰屑即可拿出，酒精擦拭管壁，移入超净工作台。

稀释离心去除 DMSO：无菌拧开冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4.5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃上层冻存上清。

重悬接种铺瓶：倒掉离心上清，加入 2mL 脐动脉内皮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬管底细胞沉淀，打散细胞团块，悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，多角度晃动培养瓶，细胞均匀铺在瓶底。

静置孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，减少挪动，利于内皮细胞贴壁生长。

换液镜检：培养 24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔冲洗细胞层，去除漂浮死细胞、碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察多边形内皮细胞形态，检查污染。

传代扩增：细胞汇合度 80%，弃培养基，PBS 清洗细胞层 2 次，加入胰酶消化液，37℃孵育 1‑3min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集全部细胞悬液，离心，按比例分瓶传代。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。