产品名称 | 小鼠皮肤肥大细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Mouse Skin Mast Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2990 |
方法简介 实验室分离的小鼠皮肤肥大细胞采用胶原酶-胰蛋白酶混合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠皮肤肥大细胞经CD117免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠皮肤肥大细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠皮肤肥大细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠R-脊椎蛋白1(RSPO1)elisa试剂盒 | KMS-28BM多发性骨髓瘤 |
大鼠复制蛋白A(RPA-70)elisa试剂盒 | 小鼠视网膜神经节细胞 |
大鼠视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)elisa试剂盒 | 小鼠海马神经干细胞 |
大鼠Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)elisa试剂盒 | 鸡卵泡基膜细胞 |
大鼠白细胞活化黏附因子(ALCAM)elisa试剂盒 | 人甲状腺癌细胞ARO(STR鉴定正确) |
大鼠白细胞介素12(IL-12)elisa试剂盒 | 小鼠肺动脉内皮细胞 |
猪间接胆红素（IBIL）elisa试剂盒 | 大鼠原代DC细胞 |
Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞专用培养基 | BHMT基因过表达细胞株 |
K7M2WT (K7M2-wt)小鼠骨肉瘤成骨细胞专用培养基 | GIMAP2基因过表达细胞株 |
人原代根尖牙乳头干细胞专用培养基 | LRCH3基因过表达细胞株 |
C1498细胞专用培养基 | DACH2基因过表达细胞株 |
人原代睾丸血管内皮细胞专用培养基 | BCKDHB基因过表达细胞株 |
小鼠皮肤肥大细胞ZJU-0430+luc细胞专用培养基 | ERG基因过表达细胞株 |
C643细胞专用培养基 | JADE2基因过表达细胞株 |
复苏准备：小鼠皮肤肥大细胞专用完全培养基、无菌 PBS、温和消化工作液 37℃水浴回温，超净台紫外照射 30min 灭菌，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头耗材，核对冻存管编号，确认无漏液破损。
水浴解冻冻存管：从液氮罐取出冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，留有少量冰屑即可拿出，酒精擦拭管壁，移入超净台。
稀释离心去除冻存保护剂：无菌拧开冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4.5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃去含 DMSO 上层冻存上清。
重悬细胞接种：倒掉离心上清，加入 2mL 皮肤肥大细胞完全培养基，轻柔吹打重悬管底沉淀，打散细胞团块，肥大细胞部分悬浮生长，不要过度吹打，细胞悬液转移至 T25 培养瓶，补加足量培养基，轻晃培养瓶混匀。
培养箱静置孵育：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置培养 24h，减少挪动，兼顾贴壁与悬浮细胞存活。
换液观察状态：24h 后取出培养瓶，收集瓶内全部细胞悬液离心，弃旧培养基，PBS 轻洗沉淀，更换预热新鲜完全培养基，回种至培养瓶，每日显微镜观察细胞颗粒形态，检查污染。
传代扩增：细胞密度达到适宜浓度，收集全部细胞悬液离心，弃上清，加入新鲜完全培养基重悬，按细胞计数结果分瓶，肥大细胞以悬浮为主，避免强力胰酶长时间消化。
