小鼠皮层神经元细胞

小鼠皮层神经元细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的皮层神经元细胞来源脑组织或神经节中分离神经元细胞，经 0.25% 胰蛋白酶和胶原酶 II 联合消化后，接种于多聚赖氨酸（PLL）/纤连蛋白双包被的培养表面，使用 Neurobasal 培养基（含 B27 添加剂、NGF 及 GlutaMAX）培养；通过免疫荧光染色检测神经元特异性标志物 β-III-tubulin（Tuj1）、MAP2、NeuN 及 synapsin-1 表达，结合倒置显微镜观察神经元突起延伸形态，并经膜片钳记录验证动作电位发放功能。

产品名称：小鼠皮层神经元细胞

英文名称： Mouse Cortical Neurons

组织来源： 脑组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠皮层神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠皮层神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠皮层神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

小鼠皮层神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：皮层神经元细胞专用完全培养基、无菌 PBS，神经元对胰酶敏感，提前备好无血清消化工作液，37℃水浴回温全部试剂，超净台紫外消毒 30min，准备多聚赖氨酸包被好的 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌耗材，检查冻存管完好。

冻存管水浴解冻：液氮取出冻存管，快速置于 37℃水浴，轻柔晃动 1‑2min，大部分冰晶融化，残留少量冰屑即可取出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净工作台。

稀释离心：无菌打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到装有 4mL 预热神经元完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，800r/min 低速离心 6min，神经元脆弱，降低转速减少细胞损伤，弃去冻存上清。

重悬接种铺瓶：离心结束弃上清，加入 2mL 皮层神经元完全培养基，极轻柔吹打重悬细胞沉淀，严禁剧烈吹打损伤神经元，将细胞悬液转移至多聚赖氨酸包被 T25 瓶，补加培养基，缓慢晃动培养瓶，使细胞均匀分布。

恒温孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，绝对不要挪动摇晃，神经元贴壁脆弱，晃动会造成大量细胞漂浮死亡。

半量换液镜检：24h 后，只吸出一半旧培养基，补入同等体积预热新鲜神经元完全培养基，不进行 PBS 冲洗，防止冲掉贴壁神经元，放回培养箱，每日镜检神经元突起生长状态，排查污染。

传代处理：原代皮层神经元分化后很难传代；若为复苏后扩增，汇合合适时，使用神经元专用温和消化液短暂消化，立刻加培养基终止，低速离心收集细胞，接种至新包被培养瓶，全程操作力度轻柔。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。