产品名称 | 小鼠胚胎肝母细胞 | 组织来源 | 胚胎；肝脏 |
英文名称 | Mouse Embryonic Hepatoblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3331 |
方法简介 实验室分离的小鼠胚胎肝母细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠胚胎肝母细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠胚胎肝母细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠胚胎肝母细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取肝脏组织约2-3g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、William E培养基/KSOM培养基、FBS、PBS、肝素
分离纯化步骤
取实验动物肝脏组织，通过门静脉灌注0.25%胰蛋白酶(37度、20分钟)
取出肝脏，剪碎后加入II型胶原酶37度振荡消化45-60分钟
消化液经70um和40um滤网过滤，100g离心5分钟收集肝细胞
采用Percoll不连续密度梯度离心(30%/60%)纯化肝细胞
原代培养要点
肝细胞：使用William E培养基+10%FBS+100nM地塞米松+10ug/mL胰岛素
肝细胞接种后4-6小时开始贴壁，24小时内形成典型多角形上皮样细胞
肝细胞培养3-7天后功能逐渐下降，建议实验在培养7天内完成
肝星状细胞：使用DMEM/F12+10%FBS培养，细胞呈成纤维细胞样生长
常见问题优化
肝细胞活力差：灌注压力控制在10-12mmHg，消化时间严格控制
肝细胞功能丧失：培养基中添加HGF(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可维持肝细胞功能
肝星状细胞活化：传代后细胞逐渐活化，建议冻存早期细胞
大鼠酪氨酸蛋白激酶受体(RTKs)elisa试剂盒 | J558多发性骨髓瘤 |
大鼠R-脊椎蛋白1(RSPO1)elisa试剂盒 | 小鼠牙龈成纤维细胞 |
大鼠核糖体蛋白S7(RPS7)elisa试剂盒 | 小鼠三叉神经星形胶质细胞 |
大鼠视黄酸相关的孤儿受体γt(RORγt)elisa试剂盒 | 原代细胞 |
大鼠白三烯D4(LTD4)elisa试剂盒 | 人胰腺癌细胞 1.1B4/PANC-1(STR鉴定正确) |
大鼠白细胞分化抗原44(CD44)elisa试剂盒 | 兔肝间质细胞 |
猪碱性蛋白酶（ALP）elisa试剂盒 | 人原代肺微血管周细胞 |
SDOW-17小鼠杂交瘤细胞专用培养基 | ZNF251基因过表达细胞株 |
ID8+LUC小鼠卵巢上皮癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | F2RL2基因过表达细胞株 |
兔原代肺动脉内皮细胞专用培养基 | GPRASP3基因过表达细胞株 |
BT-B细胞专用培养基 | C10orf67基因过表达细胞株 |
人原代宫颈癌细胞专用培养基 | FAM90A1基因过表达细胞株 |
小鼠胚胎肝母细胞Y79细胞专用培养基 | DGKB基因过表达细胞株 |
C3H/10T1/2Clone8细胞专用培养基 | GPR78基因过表达细胞株 |
复苏准备：胚胎肝母细胞专用完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰酶‑EDTA 消化液置于 37℃水浴回温，超净台紫外消毒 30min，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、全套无菌移液耗材，检查冻存管完好无开裂漏液。
冻存管水浴解冻：液氮取出冻存管，迅速放入 37℃水浴，持续轻晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，残留少量冰屑即可取出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净工作台。
稀释离心去除 DMSO：无菌打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到含有 4mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降细胞，去除冻存保护剂上清。
重悬铺瓶接种：离心结束弃上清，加入 2mL 胚胎肝母细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，打散细胞团块，悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，多角度轻晃培养瓶，细胞均匀铺板。
恒温孵育贴壁：培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，尽量不移动培养瓶，肝母细胞贴壁速度较慢，避免晃动干扰贴壁。
换液镜检：24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，清除悬浮死细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日镜检上皮样细胞形态，排查微生物污染。
传代操作：细胞汇合度 75‑80%，弃培养基，PBS 清洗细胞 2 次，加入胰酶消化液 37℃消化 2‑4min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞，离心，按适宜比例分瓶传代。
