小鼠胚胎成纤维细胞

小鼠胚胎成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：小鼠胚胎成纤维细胞

英文名称： Mouse Embryonic Fibroblasts

组织来源： ：小鼠胚胎组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠胚胎成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠胚胎成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基： 小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠胚胎成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用普诺赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：小鼠胚胎成纤维细胞完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净工作台紫外照射 30min 灭菌，备好 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头耗材，核对冻存管编号，确认无漏液破损。

水浴解冻冻存管：取出液氮罐冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，留有少量冰屑即可拿出，酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心去除冻存保护剂：无菌开启冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4‑5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃去含有 DMSO 的上层冻存上清。

重悬细胞接种：倒掉离心上清，加入 2mL 胚胎成纤维细胞完全培养基，反复轻柔吹打管底沉淀，打散细胞团聚物，细胞悬液转移至 T25 培养瓶，补加足量培养基，水平晃动培养瓶，细胞均匀铺于瓶底。

培养箱静置孵育：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置培养 24h，减少挪动，利于成纤维细胞充分贴壁伸展。

换液观察细胞状态：24h 后取出培养瓶，吸除旧培养基，无菌 PBS 轻柔冲洗细胞层，去除悬浮死细胞、碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察梭形细胞形态，检查细菌真菌污染。

传代扩增：细胞汇合度达到 85‑90%，弃培养基，PBS 洗涤细胞 2 次，加入胰酶消化液，37℃消化 2‑3min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集全部细胞悬液，离心，按 1:2‑1:3 比例分瓶传代培养。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。