小鼠膀胱移行上皮细胞

小鼠膀胱移行上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对C57BL/6小鼠的膀胱移行上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：小鼠膀胱移行上皮细胞

英文名称： Mouse Bladder Transitional Epithelial Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠膀胱移行上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠膀胱移行上皮细胞经Cytokeratin-AE1/AE3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠膀胱移行上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠膀胱移行上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：膀胱移行上皮细胞专用完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净工作台紫外消毒 30min，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头等耗材，核对冻存管，确认完好无漏液。

水浴快速解冻冻存管：从液氮取出冻存管，浸入 37℃温水，轻柔摇晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，仅留少量冰屑即可取出，酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心去除 DMSO：无菌拧开冻存管，细胞悬液缓慢滴入装有 4.5mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，弃去上层冻存上清。

重悬接种铺瓶：倒掉离心上清，加入 2mL 膀胱移行上皮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬管底细胞沉淀，打散细胞团块，悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，多角度晃动培养瓶，细胞均匀铺在瓶底。

静置孵育贴壁：培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，减少挪动，帮助上皮细胞贴壁生长。

换液清除死细胞：培养 24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔冲洗细胞层，去除漂浮死细胞、细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察细胞形态，检查污染情况。

传代扩增：细胞汇合度 75‑80%，弃培养基，PBS 清洗细胞层 2 次，加入胰酶消化液，37℃孵育 1‑3min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集全部细胞悬液，离心，按比例分瓶传代。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。