小鼠膀胱平滑肌细胞

小鼠膀胱平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠膀胱平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：小鼠膀胱平滑肌细胞

英文名称： Mouse Bladder Smooth Muscle Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠膀胱平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠膀胱平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠膀胱平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠膀胱平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：膀胱平滑肌细胞完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰酶‑EDTA 消化液置于 37℃水浴回温，超净台紫外照射 30min 灭菌，备好 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌移液耗材，检查冻存管无开裂渗漏。

冻存管解冻：液氮罐取出冻存管，快速浸入 37℃水浴，持续轻晃 1‑2min，大部分冰晶融化，残留少量冰屑即可取出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心：打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到含有 4mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降细胞，去除 DMSO 冻存上清液。

重悬铺瓶接种：离心结束弃上清，加入 2mL 膀胱平滑肌细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，打散细胞团，悬液转移至 T25 培养瓶，补加足量培养基，多角度轻晃培养瓶，细胞均匀铺板。

恒温孵育贴壁：培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，尽量不要移动培养瓶，保障平滑肌细胞贴壁伸展。

换液镜检：24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，清除悬浮死细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日镜检梭形细胞形态，排查细菌真菌污染。

传代操作：细胞汇合度 80‑85%，弃培养基，PBS 清洗细胞 2 次，加入胰酶消化液 37℃消化 2‑4min，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞，离心，按适宜比例分瓶传代。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞生长旺盛，贴壁后24小时即可见细胞迁出，约7-10天可首次传代。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。