产品名称 | 小鼠尿道上皮细胞 | 组织来源 | 尿道组织 |
英文名称 | Mouse Urethral Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2940 |
方法简介 实验室分离的小鼠尿道上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠尿道上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠尿道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠尿道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠消退素E1(RvE1)elisa试剂盒 | rRTEC大鼠肾小管上皮细胞 |
大鼠狂犬病毒抗体(RV-Ab)elisa试剂盒 | 小鼠海马神经干细胞 |
大鼠Runt相关转录因子2(RUNX2)elisa试剂盒 | 小鼠骨髓巨噬细胞 |
大鼠反三碘甲状腺原氨酸(rT3)elisa试剂盒 | H-4-II-E-C3 [H4-II-E-C3] (大鼠肝癌细胞) |
大鼠白介素受体相关激酶3(IRAK3)elisa试剂盒 | 永生化人子宫内膜异位症细胞12Z(STR鉴定正确) |
大鼠白三烯(LTs)elisa试剂盒 | 小鼠耳软骨细胞 |
猪胶质细胞系来源的神经营养因子（GDNF）elisa试剂盒 | 人原代星形胶质细胞 |
RGC-5小鼠视网膜神经节细胞专用培养基 | ENPP4基因过表达细胞株 |
HL-1小鼠心肌细胞专用培养基 | ADAMDEC1基因过表达细胞株 |
大鼠原代海绵体平滑肌细胞专用培养基 | SUSD2基因过表达细胞株 |
BRL-3A细胞专用培养基 | CYP2A7基因过表达细胞株 |
人原代骨骼肌成纤维细胞专用培养基 | C2CD2基因过表达细胞株 |
小鼠尿道上皮细胞WRL68细胞专用培养基 | JADE2基因过表达细胞株 |
BxPC-3细胞专用培养基 | GFOD2基因过表达细胞株 |
复苏准备：小鼠尿道上皮细胞专用完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净工作台紫外消毒 30min，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、全套无菌移液耗材，检查冻存管完好无漏液。
冻存管水浴解冻：液氮取出冻存管，迅速放入 37℃水浴，持续轻晃冻存管 1‑2min，大部分冰晶融化，残留微小冰屑即可取出，75% 酒精擦拭外壁，移入超净台。
稀释离心除 DMSO：无菌打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到装有 4mL 预热完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降细胞，去除冻存保护剂上清。
重悬接种铺瓶：离心完毕弃上清，加入 2mL 尿道上皮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬底部细胞沉淀，打散细胞团，悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，多角度轻晃培养瓶，让细胞均匀分布瓶底。
恒温箱静置孵育：培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，不频繁移动，帮助上皮细胞贴壁生长。
换液镜检：24h 后取出，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，清除悬浮死细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日镜检细胞形态，排查微生物污染。
传代处理：细胞汇合度 75‑80%，弃培养基，PBS 清洗细胞 2 次，加入胰酶消化液 37℃消化 1‑3min，镜下细胞回缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞，离心，按合适比例分瓶传代。
