小鼠脑静脉血管内皮细胞

小鼠脑静脉血管内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离C57BL/6小鼠脑静脉血管内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：小鼠脑静脉血管内皮细胞

英文名称： Mouse Cerebral Venous Endothelial Cells

组织来源： 脑静脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脑静脉血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脑静脉血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠脑静脉血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脑静脉血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：脑静脉血管内皮细胞专用完全培养基、无菌 PBS、0.25% 胰酶‑EDTA 消化液置于 37℃水浴回温，超净工作台紫外照射 30min 灭菌，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、全套无菌移液耗材，检查冻存管无开裂渗漏。

冻存管解冻：取出液氮内冻存管，迅速放入 37℃水浴，不断轻晃，1‑2min，大部分冰晶融化，残留少量冰屑即可取出，酒精擦拭管壁，移入超净台。

稀释离心：打开冻存管，细胞悬液缓慢滴入含有 4mL 预热完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降细胞，去除含有 DMSO 的冻存上清液。

重悬接种：离心结束弃上清，加入 2mL 脑静脉内皮细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，打散细胞团，将悬液移入 T25 培养瓶，补加培养基，多角度轻晃培养瓶，让细胞均匀铺于瓶底。

恒温孵育贴壁：培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，尽量不移动瓶子，保障内皮细胞贴壁。

换液镜检：24h 后取出，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗细胞层，清除悬浮死细胞碎片，更换预热新鲜完全培养基，放回培养箱，每日镜检细胞形态，排查细菌真菌污染。

传代操作：细胞汇合度 80%，弃培养基，PBS 清洗细胞 2 次，加入胰酶消化液 37℃消化 1‑3min，镜下细胞回缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞，离心，按适宜比例分瓶传代。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。