产品名称 | 小鼠脑成纤维细胞 | 组织来源 | 脑组织 |
英文名称 | Mouse Brain Fibroblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3033 |
方法简介 实验室分离的小鼠脑成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠脑成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠脑成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠脑成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠S100钙结合蛋白A6(S100A6)elisa试剂盒 | F11大鼠背根神经节细胞 |
大鼠S100A12钙结合蛋白(S100A12)elisa试剂盒 | 小鼠脾淋巴细胞 |
大鼠S100蛋白(S-100)elisa试剂盒 | 小鼠肌腱成纤维细胞 |
大鼠维甲类X受体α(RXRα)elisa试剂盒 | C6/36 [Clone C6/36] (蚊子细胞) |
大鼠白介素28(IL-28)elisa试剂盒 | 大鼠正常肝细胞BRL3A（种属鉴定） |
大鼠白介素28受体(IL-28R)elisa试剂盒 | 人心脏血管平滑肌细胞 |
猪金属肽酶含血小板反应蛋白1（ADAMTS1）elisa试剂盒 | 兔原代胃平滑肌细胞 |
RAG小鼠肾腺癌细胞专用培养基 | GARIN2基因过表达细胞株 |
H22小鼠肝癌细胞专用培养基 | GBGT1基因过表达细胞株 |
人原代脉络膜成纤维细胞专用培养基 | C10orf67基因过表达细胞株 |
Bend.3细胞专用培养基 | E2F3基因过表达细胞株 |
人原代骨微血管内皮细胞专用培养基 | CYP7B1基因过表达细胞株 |
小鼠脑成纤维细胞VERO细胞专用培养基 | BTRC基因过表达细胞株 |
BRL-3A细胞专用培养基 | ZP2基因过表达细胞株 |
复苏准备：脑成纤维细胞完全培养基、PBS 缓冲液、0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液 37℃水浴回温，超净工作台紫外照射 30min 灭菌，准备 T25 培养瓶、15mL 离心管、无菌枪头，核对细胞冻存管编号，确认无漏液破损。
快速解冻细胞：取出液氮保存冻存管，浸入 37℃水浴，轻轻晃动冻存管，1‑2min，大部分冰晶融化，少量冰屑残留即可拿出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净台内。
稀释去除冻存剂：无菌打开冻存管，将细胞悬液缓慢加入装有 4.5mL 预热完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降活细胞，去除含 DMSO 的冻存上清。
重悬接种培养瓶：离心结束弃上清，加入 2mL 脑成纤维细胞完全培养基，充分吹打重悬底部细胞沉淀，打散细胞团，转移悬液至 T25 培养瓶，补加培养基，平稳摇晃培养瓶使细胞分散均匀。
培养箱静置贴壁：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，不随意挪动瓶子，保障成纤维细胞充分贴壁铺展。
换液清除死细胞：24h 后取出培养瓶，吸弃旧培养基，PBS 轻柔冲洗细胞层，清除漂浮死细胞、碎片，更换新鲜预热完全培养基，放回培养箱，每日显微镜观察细胞生长状态、污染情况。
传代操作：细胞汇合度至 85‑90%，弃培养基，PBS 清洗细胞两次，加入胰酶消化液，37℃孵育 2‑3min，镜下细胞回缩变圆，加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞悬液，离心，按 1:2‑1:3 比例分瓶传代继续培养。
