小鼠卵巢上皮细胞

小鼠卵巢上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对C57BL/6小鼠的卵巢上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：小鼠卵巢上皮细胞

英文名称： Mouse Ovarian Epithelial Cells

组织来源： 卵巢组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠卵巢上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠卵巢上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠卵巢上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠卵巢上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

卵巢组织取材预处理：雌性小鼠消毒处死后解剖取出双侧卵巢，预冷无菌 PBS 充分冲洗；剔除输卵管、脂肪等附属组织，完整保留卵巢表面上皮结构。

卵巢上皮组织剥离收集：将卵巢放置无菌培养皿，DispaseⅡ 酶 37℃短时间孵育卵巢组织，促使卵巢表面上皮松动；显微镊子轻柔撕取卵巢表层上皮薄片，PBS 漂洗上皮碎片，尽量少带卵巢间质组织。

酶消化解离上皮细胞：收集上皮薄片，剪碎后加入 0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液，37℃水浴孵育 15‑20 min，间断轻柔吹打；细胞解离完成，加入卵巢上皮细胞完全培养基终止消化。

过滤处理，离心收集沉淀：消化后的细胞悬液过 300 目无菌细胞筛除去组织残渣；滤液 1100 r/min 离心 7 min，弃除上层废液，获得卵巢上皮细胞沉淀。

重悬纯化，细胞接种铺板：卵巢上皮专用完全培养基轻柔重悬细胞沉淀；差速贴壁去除卵巢间质来源成纤维细胞杂细胞，短暂预贴壁，收集未贴壁上皮细胞；计数后接种胶原包被培养器皿。

细胞培养维护、定期换液：37℃、5% CO₂培养箱孵育，接种 24 h 全量换液清除死细胞，后续每 2‑3 d 更换新鲜培养基；观察多边形上皮细胞形态，严格监控间质成纤维细胞污染。

细胞鉴定与冻存保存：CK‑18、E‑cadherin 上皮标志物免疫荧光鉴定细胞纯度；原代卵巢上皮增殖能力弱，汇合 70‑80% 即可冻存，梯度降温液氮储存，复苏尽快用于体外实验。

1.血管组织取材后需立即置于冰预冷的M199培养基中运输，尽快去除外膜结缔组织和脂肪组织。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。