产品名称 | 小鼠卵巢成纤维细胞 | 组织来源 | 卵巢组织 |
英文名称 | Mouse Ovarian Fibroblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2898 |
方法简介 实验室分离的小鼠卵巢成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠卵巢成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠卵巢成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠卵巢成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠S100B蛋白(S100B)elisa试剂盒 | MOLT-4白血病 |
大鼠S100钙结合蛋白A8;A9复合物(S100A8;A9)elisa试剂盒 | 小鼠角质形成细胞 |
大鼠S100钙结合蛋白A8复合物(S100A8)elisa试剂盒 | 小鼠子宫内膜间质细胞 |
大鼠S100钙结合蛋白A4(S100A4)elisa试剂盒 | B95-8 (绒猴EB病毒转化的白细胞) |
大鼠白介素1受体2(IL-1R2)elisa试剂盒 | 293T过表达ACE2细胞株 293T/ACE2 (STR鉴定正确) |
大鼠白介素1受体关联激酶4(IRAK4)elisa试剂盒 | 大鼠主动脉外膜成纤维细胞 |
猪精胺（Spermine）elisa试剂盒 | 兔原代股骨头微血管内皮细胞 |
panc02小鼠胰腺癌细胞专用培养基 | ZNF750基因过表达细胞株 |
GL-261小鼠胶质瘤细胞专用培养基 | CDC40基因过表达细胞株 |
兔原代骨髓基质干细胞专用培养基 | BCKDHB基因过表达细胞株 |
BCPaP 细胞专用培养基 | DGKB基因过表达细胞株 |
人原代黑色素瘤细胞专用培养基 | GPR20基因过表达细胞株 |
小鼠卵巢成纤维细胞UMNSAH/DF-1细胞专用培养基 | FAM171A2基因过表达细胞株 |
Beta-TC-6细胞专用培养基 | GARIN2基因过表达细胞株 |
卵巢组织取材处理：选取性成熟雌性小鼠，消毒处死后开腹，解剖摘取双侧卵巢组织，浸泡预冷无菌 PBS；精细剔除卵巢周边输卵管、脂肪、结缔组织，PBS 反复冲洗卵巢组织表面血液杂质。
组织处理去除卵泡结构：无菌培养皿内，显微器械剔除卵巢表面卵泡颗粒细胞团块，保留卵巢间质结缔组织；眼科剪将间质结缔组织剪碎至 1 mm³ 大小组织碎块，PBS 洗涤碎块两次。
胶原酶消化解离组织块：加入 Ⅰ 型胶原酶消化液完全浸没组织碎块，37℃水浴摇床消化 60‑90 min，间隔 15 min 轻柔吹打；组织松散解离，加入成纤维细胞完全培养基终止酶消化。
过滤除残渣，离心收集细胞：消化悬液过 200 目无菌细胞筛，除去未消化组织碎片；收集滤液，1000 r/min 离心 6‑7 min，弃除上清废液，得到卵巢成纤维细胞沉淀。
重悬计数，细胞接种铺板：成纤维细胞完全培养基轻柔重悬沉淀，打散细胞团；活细胞计数，调整细胞浓度接种于无菌培养瓶，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育。
细胞培养换液与传代扩增：接种 24 h 全量换液去除悬浮死细胞，后续每 2‑3 d 更换新鲜培养基；细胞汇合度到达 85‑90%，PBS 清洗，胰酶消化，吹打制备单细胞悬液分瓶传代，控制传代次数。
细胞鉴定、冻存储备：Vimentin 成纤维细胞标志物免疫荧光鉴定细胞纯度；选取对数生长期无污染细胞配置冻存液，程序降温盒梯度降温，液氮罐长期冻存；复苏快速融化，去除冻存保护剂再接种。
