小鼠淋巴结淋巴细胞

小鼠淋巴结淋巴细胞

采用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠的淋巴结淋巴细胞来源血液或组织中分离免疫细胞，经 NH₄Cl 裂解红细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 RPMI-1640 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL M-CSF/G-CSF）培养；通过流式细胞术检测 CD11b、F4/80（大鼠）、CD14、CD86 等巨噬细胞/免疫细胞标志物表达，结合 MTT 增殖实验和吞噬功能实验（荧光微球吞噬 assay）验证免疫细胞活性与功能。

产品名称：小鼠淋巴结淋巴细胞

英文名称： Mouse Lymph Node Lymphocytes

组织来源： 淋巴结

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠淋巴结淋巴细胞采用分离淋巴结组织、研磨获取单细胞悬液后通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠淋巴结淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠淋巴结淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠淋巴结淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

淋巴结解剖取材：小鼠颈椎脱臼处死，75% 乙醇全身消毒；无菌条件下解剖，摘取腋窝、腹股沟、肠系膜部位淋巴结组织，放置预冷无菌 PBS 培养皿；小心剔除附着淋巴结表面脂肪、结缔组织。

组织研磨制备单细胞悬液：将淋巴结放置无菌筛网（200 目）之上，筛网置于盛有 RPMI‑1640 基础培养基的培养皿；无菌注射器活塞轻柔研磨碾压淋巴结组织，使淋巴细胞充分穿过筛网，释放至培养基之中。

去除组织残渣，收集粗悬液：研磨完成，收集筛网下方全部细胞‑培养基混合液体，转移至无菌离心管，丢弃筛网上残留的结缔组织残渣。

离心沉淀细胞，裂解红细胞：1000 r/min 室温离心 5 min，弃上清；加入预冷红细胞裂解液，轻柔吹打重悬细胞沉淀，室温孵育 3‑5 min 裂解红细胞；立刻加入足量 RPMI‑1640 培养基终止裂解反应。

二次离心洗涤与活细胞计数：800 r/min 离心 5 min，弃上清废液；RPMI‑1640 完全培养基重悬洗涤细胞沉淀，重复洗涤 1 次；台盼蓝染色计数活淋巴细胞，调整细胞悬液浓度。

细胞接种体外培养孵育：将淋巴细胞悬液接种于培养板，加入淋巴细胞完全培养基；置于 37℃、5% CO₂细胞培养箱培养；根据实验需求可加入相应刺激剂诱导淋巴细胞活化增殖，定期观察细胞悬浮生长状态。

细胞鉴定、短期保存处理：采用 CD3、CD19 流式抗体鉴定 T、B 淋巴细胞亚群；淋巴细胞为原代悬浮细胞，不适合长期冻存，如需冻存，配置悬浮细胞专用冻存液梯度降温液氮保存；体外尽量短时间培养，避免细胞大量凋亡。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。