产品名称 | 小鼠精原干细胞 | 组织来源 | 睾丸组织 |
英文名称 | Mouse Spermatogonial Stem Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3173 |
方法简介 实验室分离的小鼠精原干细胞采用先机械吹打、后胰蛋白酶消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠精原干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠精原干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠精原干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠鞘氨醇1-磷酸受体3(S1P3)elisa试剂盒 | C8166白血病 |
大鼠1-磷酸鞘氨醇(S1P)elisa试剂盒 | 小鼠卵泡膜细胞 |
大鼠S100B蛋白(S100B)elisa试剂盒 | 小鼠胰腺导管上皮细胞 |
大鼠S100钙结合蛋白A8;A9复合物(S100A8;A9)elisa试剂盒 | BHK-21 [C-13] (仓鼠肾成纤维细胞) |
大鼠白介素13受体α1(IL-13Ra1)elisa试剂盒 | 人涎腺腺样囊性癌细胞ACC-2(STR鉴定正确) |
大鼠白介素1β前体(pro-IL1B)elisa试剂盒 | 羊肺动脉平滑肌细胞 |
猪巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）elisa试剂盒 | 人原代股骨头微血管内皮细胞 |
P19小鼠畸胎瘤细胞专用培养基 | ARMCX5基因过表达细胞株 |
G422小鼠脑神经胶质母细胞专用培养基 | C8B基因过表达细胞株 |
猪原代垂体细胞专用培养基 | CRNN基因过表达细胞株 |
B16细胞专用培养基 | FAM8A1基因过表达细胞株 |
人原代滑膜间充质干细胞专用培养基 | GFOD2基因过表达细胞株 |
小鼠精原干细胞U87MG+RFP细胞专用培养基 | CFAP52基因过表达细胞株 |
BEGMkit培养基 | TUBGCP4基因过表达细胞株 |
睾丸组织取材预处理：选取出生 6‑8 d 雄性小鼠，75% 乙醇消毒处死，无菌解剖取出双侧睾丸组织，置于预冷无菌 PBS；小心剥离睾丸外层白膜，剔除附睾、血管、脂肪结缔组织，收集睾丸曲细精管组织，PBS 多次冲洗。
曲细精管分散与预消化：把剥离白膜后的睾丸组织打散散开曲细精管，PBS 洗涤；加入胶原酶 Ⅳ 消化液，37℃水浴孵育 15‑20 min，消解睾丸间质组织，消化后 PBS 洗涤，沉降收集曲细精管小管。
胰酶消化解离生殖细胞：吸除洗涤液，加入 0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液，37℃水浴孵育 10‑15 min，间断轻柔吹打，使曲细精管内部细胞充分解离，加入含血清干细胞完全培养基终止酶消化。
过滤离心获取细胞粗悬液：细胞混合悬液依次过 100 目、400 目无菌细胞筛，滤除组织残渣；滤液 1200 r/min 离心 7 min，弃上清，获得睾丸来源细胞混合沉淀。
差速贴壁纯化精原干细胞与接种：干细胞完全培养基重悬沉淀；差速贴壁去除睾丸间质细胞、支持细胞杂细胞，将细胞悬液接种至未包被培养皿孵育 2‑3 h，支持细胞贴壁，收集未贴壁精原干细胞悬液；计数后接种于层粘连蛋白包被的培养器皿。
干细胞培养、换液维持干性：37℃、5% CO₂培养箱培养，采用精原干细胞专用培养基；每 2 d 半量更换新鲜干细胞培养基，观察精原干细胞形成簇状克隆，严格把控培养条件，防止干细胞分化。
干细胞鉴定与冻存保藏：使用 PLZF、Oct‑4 精原干细胞特异性标志物免疫荧光鉴定细胞；收集状态良好未分化的干细胞，配置干细胞专用冻存液，缓慢梯度降温后液氮长期保存；复苏操作轻柔，减少干细胞损伤。
