小鼠晶状体上皮细胞

小鼠晶状体上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对C57BL/6小鼠的晶状体上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征

产品名称：小鼠晶状体上皮细胞

英文名称： Mouse Lens Epithelial Cells

组织来源： 晶状体组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠晶状体上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠晶状体上皮细胞经BFSP2（晶状体蛋白）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠晶状体上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠晶状体上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

眼球与晶状体取材：小鼠消毒处死后摘取完整眼球，浸泡预冷无菌 PBS；体视显微镜下剪开眼球巩膜，小心取出透明晶状体组织，剔除虹膜、玻璃体、视网膜等周边附属组织，PBS 轻柔冲洗晶状体表面杂质。

晶状体上皮组织剥离：将晶状体放置培养皿，显微镊子撕开晶状体囊膜，收集附着于囊膜内侧的晶状体上皮组织，尽量不要混入晶状体纤维组织，PBS 漂洗囊膜上皮碎片。

酶消化解离上皮细胞：收集囊膜上皮碎片移入离心管，加入 0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液，37℃水浴孵育 20‑30 min，间隔 10 min 轻柔吹打，待细胞解离，添加上皮细胞完全培养基终止消化反应。

过滤处理，离心富集细胞：细胞悬液过 300 目无菌筛网，除去囊膜组织残渣；收集滤液，1100 r/min 离心 7 min，缓慢弃除上清，保护松散细胞沉淀。

重悬计数，接种铺板：晶状体上皮细胞专用完全培养基轻柔重悬细胞沉淀；活细胞计数，调整细胞密度，接种于明胶包被的培养板、培养瓶，置于 37℃、5% CO₂培养箱孵育。

细胞培养维护与换液：接种 24 h 后全量换液，清除漂浮死细胞，之后每 2‑3 d 更换新鲜培养基；显微镜观察多边形上皮细胞形态，避免成纤维细胞杂细胞大量增殖。

细胞鉴定、冻存保管：使用 α‑crystallin 晶状体特异性蛋白、CK 标志物做免疫荧光鉴定；原代晶状体上皮细胞传代能力有限，低汇合度冻存；程序梯度降温后液氮长期保存，尽量使用初代细胞开展体外实验。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.成纤维细胞生长旺盛，贴壁后24小时即可见细胞迁出，约7-10天可首次传代。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。