小鼠结肠黏膜上皮细胞

小鼠结肠黏膜上皮细胞

基于组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的结肠黏膜上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：小鼠结肠黏膜上皮细胞

英文名称： Mouse Colonic Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 结肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

结肠组织解剖取材处理：颈椎脱臼处死小鼠，75% 乙醇消毒腹部，剪开腹腔，分离结肠肠段，避开盲肠、直肠交界；完整取出结肠组织，置于预冷无菌 PBS 中，剔除肠系膜、脂肪以及血管结缔组织。

肠管冲洗与黏膜剥离：使用预冷 PBS 反复冲洗结肠肠腔内部，彻底清除粪便内容物；纵向剪开结肠肠管，展平肠组织，显微器械轻柔刮取结肠黏膜层，尽量不要刮取下层平滑肌组织，收集黏膜组织碎块，PBS 多次漂洗。

螯合预处理联合酶消化：黏膜组织碎块先使用预冷 EDTA‑PBS 溶液 4℃孵育 20‑30 min，解离细胞间紧密连接；吸除 EDTA 溶液，加入胶原酶 Ⅴ 消化液，37℃水浴消化 30‑50 min，间断轻柔吹打，之后加入上皮细胞完全培养基终止消化。

过滤离心富集细胞：消化混合悬液过 200 目、400 目双层无菌筛网，滤除组织残渣；滤液 1200 r/min 离心 7 min，小心弃上清，得到结肠黏膜上皮细胞沉淀。

重悬纯化，细胞接种：专用结肠上皮完全培养基重悬细胞沉淀；利用差速贴壁去除成纤维细胞杂细胞，短暂预贴壁，收集未贴壁上皮细胞，活细胞计数，接种至提前包被胶原的培养瓶板。

细胞培养与换液管控：37℃、5% CO₂培养箱孵育，接种 18‑24 h 后全量更换培养基，清除漂浮死细胞、肠腺碎片；之后每 2‑3 d 半量换液；观察上皮样细胞克隆，警惕平滑肌、成纤维细胞杂细胞增殖污染。

细胞鉴定、冻存储备：CK‑18、E‑cadherin 上皮标志物免疫荧光鉴定；原代结肠上皮增殖能力有限，少传代；状态优良细胞配置冻存液梯度降温，液氮罐长期保存，复苏后尽快用于实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。