小鼠肌腱干细胞

小鼠肌腱干细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的肌腱干细胞来源组织（骨髓/脐带/脂肪等）中分离间充质成分，经密度梯度离心纯化单核细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 α-MEM 培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过流式细胞术检测干细胞标志物 CD90、CD44、CD105、STRO-1 表达，结合三系分化能力验证（成骨诱导 ALP 阳性/阿利新蓝染色、成脂诱导 Oil Red O 染色、成软骨诱导 Alcian Blue 染色）确认干细胞多能性。

产品名称：小鼠肌腱干细胞

英文名称： Mouse Tendon Stem/Progenitor Cells

组织来源： 肌腱组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肌腱干细胞采用胶原酶、中性蛋白酶混合消化法并通过肌腱干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肌腱干细胞经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠肌腱干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肌腱干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌准备：超净台紫外消毒 30min，肌腱干细胞完全培养基、PBS、胰酶消化液，37℃水浴预热；T25 培养瓶、离心管，标记细胞信息。

冻存细胞复苏：冻存管 37℃水浴快速融化，酒精消毒管壁移入超净台，细胞悬液加入干细胞完全培养基离心管轻柔混匀。

离心去除冻存保护剂：300g 室温离心 6min，小心吸弃上清，干细胞沉淀轻柔对待。

重悬接种：加入肌腱干细胞完全培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，活细胞计数，接种 T25 培养瓶，多角度晃动培养瓶。

恒温孵育贴壁扩增：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，复苏 48h 减少开箱移动。

换液纯化细胞：48h 后首次换液，吸除旧培养基，PBS 轻柔冲洗细胞层，去除悬浮死细胞杂质，补入新鲜完全培养基，每 2‑3 天换液，观察梭形干细胞克隆。

消化传代处理：细胞汇合 70‑80%，弃培养基，PBS 洗涤，胰酶消化，镜下细胞回缩脱落，培养基终止消化；离心收集细胞，开展肌腱定向分化实验。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。