产品名称 | 小鼠骺软骨细胞 | 组织来源 | 生长板组织 |
英文名称 | Mouse Epiphyseal Chondrocytes | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3211 |
方法简介 实验室分离的小鼠骺软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠骺软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠骺软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠骺软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠短链酰基辅酶A脱氢酶(SCAD)elisa试剂盒 | COLO 201结肠癌 |
大鼠血影蛋白分解产物(SBDPs)elisa试剂盒 | 猪甲状腺上皮细胞 |
大鼠可溶性淀粉酶前体蛋白a(sAPPa)elisa试剂盒 | 兔牙龈成纤维细胞 |
大鼠S-腺苷蛋氨酸合成酶(SAM-s)elisa试剂盒 | 人膀胱平滑肌细胞 |
大鼠癌胚抗原相关细胞粘附分子1(CEACAM1)elisa试剂盒 | 人皮肤鳞状细胞癌细胞Colo-16 (STR鉴定正确) |
大鼠氨基端前心钠肽(NT-ProANP)elisa试剂盒 | 人羊水干细胞 |
猪颗粒酶B（Gzms-B）elisa试剂盒 | 兔原代星形胶质细胞 |
MOVAS小鼠主动脉血管平滑肌细胞专用培养基 | CBLL1基因过表达细胞株 |
SW1990人胰腺癌细胞专用培养基 | CDH10基因过表达细胞株 |
小鼠原代星形胶质细胞专用培养基 | GPR78基因过表达细胞株 |
AML12细胞专用培养基 | ZP2基因过表达细胞株 |
人原代角膜上皮细胞专用培养基 | GPD1基因过表达细胞株 |
小鼠骺软骨细胞TNM-FH培养基 | FBXO24基因过表达细胞株 |
AsPC-1 细胞专用培养基 | ENTPD1基因过表达细胞株 |
无菌准备：超净台紫外消毒 30min，骺软骨细胞完全培养基、PBS、胰酶消化液，37℃水浴预热；T25 培养瓶、离心管，标记细胞。
冻存细胞复苏：冻存管 37℃水浴快速融化，酒精消毒管壁移入超净台，细胞悬液转移至完全培养基离心管轻柔混匀。
离心去除冻存保护剂：300g 室温离心 5min，吸弃冻存液上清。
重悬铺瓶：加入软骨完全培养基，轻柔吹打散细胞团，细胞计数，按适宜密度接种 T25 培养瓶，多角度晃动培养瓶。
恒温孵育贴壁：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置培养，复苏 48h 不要移动培养瓶。
换液操作：48h 后首次换液，吸除旧培养基，PBS 轻柔洗涤细胞层，去除碎片死细胞，补入新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察多边形软骨细胞。
消化传代收获：细胞汇合 75‑80%，弃培养基，PBS 清洗，胰酶消化，镜下细胞回缩，培养基终止消化；收集细胞离心计数，严控传代次数，防止细胞去分化，用于生长板软骨研究。
