小鼠虹膜色素上皮细胞

小鼠虹膜色素上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从C57BL/6小鼠靶组织中分离虹膜色素上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：小鼠虹膜色素上皮细胞

英文名称： Mouse Iris Pigment Epithelial Cells

组织来源： 眼球

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠虹膜色素上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠虹膜色素上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠虹膜色素上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠虹膜色素上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌准备：超净台紫外灭菌 30min，色素上皮细胞完全培养基、PBS、胰酶消化液，37℃水浴预热；包被培养板、离心管，标记信息。

冻存细胞复苏：冻存管 37℃水浴快速融化，酒精擦拭管壁转入超净台，细胞悬液加入完全培养基离心管轻柔混匀。

离心去除冻存保护剂：300g 室温离心 6min，小心吸弃上清，保护细胞沉淀。

重悬接种：加入色素上皮完全培养基，轻柔吹打制备细胞悬液，计数活细胞，接种包被培养板，晃动板子均匀铺细胞。

孵育贴壁培养：置于 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，色素上皮贴壁缓慢，72h 减少挪动。

换液维护：72h 后首次换液，轻柔吸除旧培养基，PBS 低力度冲洗，避免冲掉细胞，补新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察带色素颗粒上皮细胞。

消化收集细胞：汇合 70‑75%，胰酶温和消化，培养基终止消化；离心收集细胞，避免多次传代，用于眼部相关体外模型实验。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。