小鼠海绵体内皮细胞

小鼠海绵体内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从C57BL/6小鼠的海绵体内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：小鼠海绵体内皮细胞

英文名称： Mouse Cavernous Endothelial Cells

组织来源： 海绵体组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠海绵体内皮细胞采用混合酶消化法结合机械分离法、并用内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠海绵体内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠海绵体内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠海绵体内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌准备：超净台紫外灭菌 30min，内皮细胞完全培养基、PBS、胰酶消化液，37℃水浴预热；明胶包被 T25 培养瓶、离心管，标记细胞名称日期。

冻存细胞复苏：冻存管 37℃水浴快速融化，酒精擦拭管壁移入超净台，细胞悬液缓慢滴入内皮完全培养基离心管混匀。

离心去除冻存保护剂：300g 室温离心 6min，小心吸走上层上清，保护底部细胞沉淀。

重悬接种：加入预热内皮完全培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，活细胞计数，接种至明胶包被培养瓶，晃动培养瓶使细胞均匀铺底。

培养箱孵育贴壁：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，复苏 48h 不要移动培养瓶，保障内皮贴壁。

换液纯化细胞：复苏 48h 首次换液，吸除旧培养基，PBS 轻柔洗涤去除悬浮死细胞碎片，补入新鲜完全培养基，每 2‑3 天换液，观察鹅卵石样内皮形态。

消化传代收集：细胞汇合 70‑75%，弃培养基，PBS 清洗，胰酶短时间消化，镜下细胞变圆脱落，培养基终止消化；离心收集细胞，用于血管舒张、小管形成相关实验。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。