小鼠肝枯否细胞

小鼠肝枯否细胞

运用 Percoll 密度梯度离心法从C57BL/6小鼠肝枯否细胞外周血或组织中提取单个核细胞，经免疫磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）纯化目标免疫细胞亚群后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含细胞因子（IL-4、IL-13 或 GM-CSF）的 IMDM 培养基培养；通过流式细胞术多色分析 CD11c、MHC-II、CD80/86 等共刺激分子表达谱，结合 ELISA 检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）分泌水平鉴定免疫细胞功能表型。

产品名称：小鼠肝枯否细胞

英文名称： Mouse Kupffer Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肝枯否细胞采用混合酶灌流消化、低速离心、密度梯度离心、差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肝枯否细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠肝枯否细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、巨噬细胞

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

小鼠肝枯否细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，残余微量冰晶取出，酒精消毒管壁送入超净台，枯否属于巨噬细胞，对刺激敏感，操作迅速。

转移稀释：打开冻存管，细胞悬液缓慢移入枯否细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。

离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心完毕，小心吸除上层冻存上清，留存松散细胞沉淀。

重悬沉淀：加入预热枯否细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，适度分散细胞团，严禁暴力吹打造成细胞活化。

接种铺板：细胞计数，按实验密度接种培养板，十字轻晃，利于细胞贴壁。

孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育 12‑24h，充分贴壁。

换液监测：12‑24h 更换培养基去除悬浮死细胞，每 2‑3 天换液，观察贴壁巨噬样形态，避免体外长时间培养。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。