小鼠肝窦内皮细胞

小鼠肝窦内皮细胞

从C57BL/6小鼠肝脏组织经胶原酶 II 原位灌注消化后收集肝细胞悬液，通过 20%/40% 双层 Percoll 梯度离心分离肝实质细胞（低密度层）和非实质细胞（高密度层），肝实质细胞接种于 Matrigel 包被培养皿中，使用 Hepatocyte Maintenance Medium（含 2% FBS、Dexamethasone、NGF 及 Transferrin）维持培养

产品名称：小鼠肝窦内皮细胞

英文名称： Mouse Liver Sinusoidal Endothelial Cells

组织来源： 肝脏组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肝窦内皮细胞采用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肝窦内皮细胞经CD31或CD14免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠肝窦内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肝窦内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，残留少量冰晶取出，75% 酒精擦拭管壁送入超净台，肝窦内皮较为脆弱，全程动作轻柔。

悬液转移：无菌打开冻存管，细胞悬液缓慢移入肝窦内皮细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。

低速离心：900r/min 离心 6min，降低离心力减少细胞损伤，离心结束小心吸弃上清冻存液，不要扰动沉淀。

重悬沉淀：加入预热肝窦内皮细胞完全培养基，使用大口径枪头轻柔吹打 3‑5 次，分散细胞团，不要反复大力吹打。

接种铺板：细胞计数，按实验密度接种包被后的培养板，十字轻轻晃动。

孵育贴壁：置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 24‑48h，尽量不要移动培养瓶。

换液观察：48h 后半量更换新鲜培养基，后续每 2‑3 天半量换液，观察肝窦内皮特征形态，汇合 75‑80% 开展实验，避免过度培养。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。