小鼠肝动脉内皮细胞

小鼠肝动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离C57BL/6小鼠肝动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：小鼠肝动脉内皮细胞

英文名称： Mouse Hepatic Artery Endothelial Cells

组织来源： 肝动脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肝动脉内皮细胞采用混合酶消化法结合差速贴壁法，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肝动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠肝动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肝动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有微量冰晶取出，酒精擦拭外壁进入超净台。

悬液转移：打开冻存管，细胞悬液转移至含有肝动脉内皮细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。

离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层冻存上清，留存底部细胞沉淀。

重悬细胞：加入预热专用完全培养基，轻柔吹打沉淀打散细胞团，制备单细胞悬液，保护内皮细胞膜完整性。

接种铺板：细胞计数，按标准密度接种，十字摇晃培养瓶，细胞均匀铺底。

孵育贴壁：置于 37℃、5% CO₂培养箱静置 24h，不移动培养容器。

换液观察：24h 更换新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察鹅卵石样内皮形态，汇合 80% 开展实验。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。