小鼠肺大静脉平滑肌细胞

小鼠肺大静脉平滑肌细胞

运用胶原酶消化法从C57BL/6小鼠肺大静脉平滑肌细胞血管组织中分离平滑肌细胞，经密度梯度离心纯化后接种于胶原 I 包被的培养表面，采用含有 10% FBS 和 5 ng/mL PDGF-BB 的 DMEM/F12 培养基进行体外扩增；通过 Western blot 和免疫荧光双重检测 α-SMA、SM22α、Calponin 及 SM-MHC 表达，并通过细胞迁移实验（Transwell）和收缩功能实验验证平滑肌细胞收缩表型。

产品名称：小鼠肺大静脉平滑肌细胞

英文名称： Mouse Pulmonary Great Vein Smooth Muscle Cells

组织来源： 肺静脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肺大静脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肺大静脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肺大静脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，残余微量冰晶取出，酒精擦拭外壁送入超净台。

转移稀释：打开冻存管，细胞悬液移入含有平滑肌完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。

离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层上清冻存液，保留细胞沉淀。

重悬细胞：加入预热肺大静脉平滑肌细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块。

接种铺板：细胞计数，按标准密度接种，十字晃动培养器皿，均匀铺布细胞。

恒温孵育：放入 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育 24h，保证细胞贴壁伸展。

换液监测：24h 更换新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察梭形细胞形态，汇合 80‑90% 传代。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。