产品名称 | 小鼠腓肠肌细胞 | 组织来源 | 骨骼肌组织 |
英文名称 | Mouse Gastrocnemius Muscle Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3418 |
方法简介 实验室分离的小鼠腓肠肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠腓肠肌细胞经α-Sarcomeric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠腓肠肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠腓肠肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取腓肠肌/心肌等目标肌肉组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物目标肌肉组织，用预冷PBS冲洗去除血液和结缔组织
剪碎组织后先经机械法分散，再加入0.25%胰蛋白酶37度消化15分钟
加入II型胶原酶继续消化30-40分钟，期间振荡2-3次
过滤后300g离心8分钟收集细胞沉淀
采用差速贴壁法或Percoll密度梯度离心纯化肌源性细胞
原代培养要点
骨骼肌细胞：使用DMEM+20%FBS培养基培养肌源性干细胞，换用2%FBS诱导分化
心肌细胞：使用M199+20%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈节律性搏动
肌卫星细胞可在培养7-10天后融合形成多核肌管(Myotube)
心肌细胞培养需注意电刺激培养可促进成熟和同步搏动
常见问题优化
肌细胞融合率低：降低培养皿FBS浓度至2%可促进肌管形成
心肌细胞搏动不协调：使用电刺激培养装置(1Hz，2ms脉冲)可促进同步搏动
成纤维细胞污染：采用Pre-plating差速贴壁法2-3次可有效富集肌源性细胞
大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA)elisa试剂盒 | VEROC1008(E6)非洲绿猴肾细胞 |
大鼠硒蛋白P(Se-P)elisa试剂盒 | 兔乳腺导管上皮细胞 |
大鼠可溶性Endoghn(sEng)elisa试剂盒 | 兔胰腺腺泡上皮细胞 |
大鼠信号素4D(SEMA4D)elisa试剂盒 | 大鼠肝实质细胞 |
大鼠β干扰素(IFN-β)elisa试剂盒 | 大鼠骨骼肌成纤维细胞 |
大鼠β-骨胶原交联(β-CTx)elisa试剂盒 | 人真皮毛乳头细胞 |
猪淋巴毒素α3（LT-α3）elisa试剂盒 | 猪原代心肌成纤维细胞 |
SW620/5FU人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株细胞专用培养基 | AIFM2基因过表达细胞株 |
SK-MEL-28人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | CCR8基因过表达细胞株 |
大鼠原代真皮毛乳头细胞专用培养基 | CTAGE1基因过表达细胞株 |
3AO细胞专用培养基 | HERPUD2基因过表达细胞株 |
人原代皮肤成纤维细胞专用培养基 | ZNF438基因过表达细胞株 |
小鼠腓肠肌细胞SUP-T1细胞专用培养基 | CAMKK2基因过表达细胞株 |
769-P细胞专用培养基 | NPAS4基因过表达细胞株 |
细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，残余微量冰晶取出，75% 酒精消毒管壁，送入超净台。
转移稀释：无菌开启冻存管，将细胞悬液移入含有骨骼肌细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。
离心洗涤：1000r/min 离心 5min，离心完成，弃除上层冻存上清，留存底部细胞沉淀。
重悬细胞沉淀：加入预热腓肠肌细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团，制备均匀细胞悬液。
接种铺板：细胞计数，按标准密度接种培养瓶，十字摇晃，均匀铺布细胞。
孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育 24h，不挪动培养瓶，保障细胞贴壁。
换液观察：24h 更换新鲜培养基，每 2‑3 天换液，观察肌细胞形态，汇合至 80%‑85%，可开展肌分化诱导或传代。
