小鼠多巴胺神经元细胞

小鼠多巴胺神经元细胞

运用胶原酶 IV 和 Dispase 联合消化法从C57BL/6小鼠多巴胺神经元细胞神经组织中分离神经元前体细胞，经密度梯度离心纯化后接种于 PLL 包被的培养皿中，采用含 B-27 supplement、NGF（10 ng/mL）和 bFGF（5 ng/mL）的 Neurobasal 完全培养基培养；通过免疫荧光双标检测 β-III-tubulin/Map2 共表达，免疫细胞化学染色显示突触蛋白（Synaptophysin）阳性，并经钙成像实验检测神经元电生理活性。

产品名称：小鼠多巴胺神经元细胞

英文名称： Mouse Dopamine Neurons

组织来源： 脑组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠多巴胺神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠多巴胺神经元细胞经TH免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠多巴胺神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

小鼠多巴胺神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏解冻：取出冻存细胞冻存管，37℃水浴快速融化，仅剩微小冰晶取出，酒精擦拭管壁，带入超净台；神经元细胞对冻存损伤敏感，融化速度尽量快。

悬液转移：无菌打开冻存管，将细胞悬液缓慢转移至多巴胺神经元专用完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀，减少剪切力。

低速离心：800r/min 离心 6min，神经元避免高转速损伤，离心结束轻柔吸除上清冻存液，小心不要扰动松散细胞沉淀。

轻柔重悬：加入预热多巴胺神经元完全培养基，使用大口径枪头缓慢轻柔吹打，仅 3‑5 次，尽量避免过度吹打损伤神经元。

接种铺板：细胞计数，按实验需求密度接种多聚赖氨酸包被好的培养板 / 瓶，十字轻轻晃动。

恒温孵育：放入 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，神经元贴壁慢，48h 内尽量不移动培养容器。

半量换液观察：48h 后进行半量换液，弃一半旧培养基补入等量新鲜培养基，不可全换，避免神经元应激死亡；每 2‑3 天半量换液，观察神经元突起生长状态。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。