小鼠肠微血管内皮细胞

小鼠肠微血管内皮细胞

从C57BL/6小鼠肠微血管内皮细胞组织标本经胶原酶-弹性蛋白酶联合消化获取单细胞悬液，通过 Percoll 密度梯度离心纯化内皮细胞组分，接种于纤维连接蛋白预包被的培养皿中，使用内皮基础培养基 supplemented with 多种生长因子（VEGF、FGF-2、IGF-1 及 Ascorbic acid）维持培养；通过免疫荧光染色显示 CD31 膜染色阳性、vWF 胞质颗粒状表达，并结合乙酰化 LDL 荧光摄取实验和内皮管腔形成 assay 综合鉴定。

产品名称：小鼠肠微血管内皮细胞

英文名称： Mouse Intestinal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肠微血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肠微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠肠微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肠微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出冻存的小鼠肠微血管内皮细胞冻存管，迅速投入 37℃水浴，快速摇晃冻存管，1‑2min 完成融化，管内仅剩微小冰晶时取出，75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒。

细胞转移：超净台内打开冻存管，用移液管将细胞悬液缓慢转移至装有完全内皮细胞培养基的 15mL 无菌离心管中，轻柔颠倒混匀，禁止剧烈震荡。

离心去除冻存保护剂：将离心管放入离心机，1000r/min 离心 5min，离心结束后小心倾倒弃去上层含 DMSO 的上清液，不要触碰底部细胞沉淀。

重悬细胞沉淀：向离心管内加入预温好的小鼠肠微血管内皮细胞专用完全培养基，用移液枪缓慢轻柔吹打管底沉淀，充分打散细胞团，制备均匀单细胞悬液，避免产生大量气泡。

细胞接种铺板：取细胞悬液进行细胞计数，按照推荐接种密度接种至细胞培养瓶或者培养板，轻轻水平十字晃动培养器皿，使细胞均匀分布，不要做旋转晃动，防止细胞聚集到器皿边缘。

细胞培养孵育：将培养器皿平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置培养，前 24h 禁止挪动培养瓶，给细胞充足贴壁时间。

换液与后续观察：培养 24h 后观察细胞贴壁状态，弃旧培养基，更换新鲜完全培养基，后续每 2‑3 天更换一次培养基，显微镜持续观察细胞形态、密度，汇合度达到 80%‑85% 即可开展传代或者后续实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。