产品名称 | 小鼠肠神经嵴干细胞 | 组织来源 | 肠组织 |
英文名称 | Mouse Enteric Neural Crest-Derived Stem Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3317 |
方法简介 实验室分离的小鼠肠神经嵴干细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠肠神经嵴干细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠肠神经嵴干细胞完全培养基(含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 球形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肠神经嵴干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)elisa试剂盒 | NCI-H322非小细胞肺癌 |
大鼠丝氨酸蛋白酶抑制剂(SERPINA5)elisa试剂盒 | 兔胰腺导管上皮细胞 |
大鼠心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(SERCA2a)elisa试剂盒 | 兔肾足细胞 |
大鼠磷酸化IKB alpha(Ser32;36)elisa试剂盒 | 小鼠骨髓基质细胞 |
大鼠β-防御素(β-DF)elisa试剂盒 | 悬浮中国仓鼠卵巢细胞ExpiCHO |
大鼠β-防御素2(β-DF2)elisa试剂盒 | 兔冠状动脉平滑肌细胞 |
猪磷酸化AKT蛋白（p-AKT）elisa试剂盒 | 兔原代杏仁核神经元细胞 |
SW579人甲状腺癌细胞专用培养基 | FBXO43基因过表达细胞株 |
SK-LU-1人低分化肺腺癌细胞专用培养基 | EFNB3基因过表达细胞株 |
人原代扁桃体动脉平滑肌细胞专用培养基 | GNAL基因过表达细胞株 |
12Z细胞专用培养基 | GRHL3基因过表达细胞株 |
人原代脾脏微血管内皮细胞专用培养基 | PRKCH基因过表达细胞株 |
小鼠肠神经嵴干细胞SU-DHL-2细胞专用培养基 | CNKSR3基因过表达细胞株 |
3D4/21细胞专用培养基 | AIFM2基因过表达细胞株 |
步骤一：干细胞高标准无菌准备 提前40分钟紫外消毒生物安全柜及所有耗材试剂，肠神经嵴干细胞属于多能干细胞，干性维持要求严苛，需最高洁净环境。提前预热神经嵴干细胞专用无血清培养基、无菌PBS、专用温和消化液，添加神经干细胞特异性生长因子。操作人员全程无菌精细化操作，杜绝污染与环境波动。
步骤二：超温和解冻保干性复苏 取出冻存的小鼠肠神经嵴干细胞，37℃水浴极轻柔解冻，严格控制解冻时间≤1分钟，留存微量冰晶立即取出，避免损伤干细胞多能性。消毒冻存管外壁，无菌缓慢转移细胞悬液至预热完全培养基中，轻柔混匀，最大程度保留细胞干性与活性。
步骤三：超低速离心纯化 设置离心机室温200g、7分钟超低速离心，避免干细胞挤压损伤、干性丢失。离心后缓慢吸弃上清废液，保留完整细胞沉淀，加入预热无菌PBS缓冲液温和重悬，再次离心清洗，彻底去除残留杂质与冻存剂。
步骤四：超低密度干性接种 吸净PBS废液，加入神经嵴干细胞专用培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，计数后调整细胞密度至7×10⁴个/mL，超低密度接种可有效抑制细胞分化、维持干性。缓慢晃动培养瓶，使细胞均匀分散。
步骤五：低氧恒温干性培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂、低氧饱和湿度培养箱静置培养36小时，神经嵴干细胞依赖低氧环境维持多能性，全程稳定培养参数，严禁开盖扰动，为干细胞自我更新提供专属微环境。
步骤六：半量低频精准换液 培养36小时后首次半量换液，仅更换1/2新鲜培养基，保留原有生长微环境，避免环境骤变诱导分化。后续每72小时半量换液一次，精准补充神经生长因子，稳定干细胞干性，维持细胞未分化状态。
步骤七：超低比例传代保功能 细胞融合度达75%时进行传代，PBS超轻柔清洗细胞，专用温和消化液消化4分钟，细胞轻微回缩后立即终止消化。温和收集细胞，低速离心重悬，按1:1.5超低比例传代，严控传代参数，持续维持神经嵴干细胞多能性与自我更新能力。
