小鼠肠黏膜上皮细胞

小鼠肠黏膜上皮细胞

基于组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的肠黏膜上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：小鼠肠黏膜上皮细胞

英文名称： Mouse Intestinal Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：高敏感细胞无菌准备 提前40分钟紫外消毒生物安全柜及所有耗材试剂，肠黏膜上皮细胞极其娇嫩、对环境敏感，需高标准无菌环境。提前预热黏膜上皮专用无血清培养基、无菌PBS、超低浓度温和消化液，所有试剂提前平衡温度。操作人员严格无菌操作，杜绝任何污染、温差与机械刺激。

步骤二：极速温和解冻复苏 取出冻存的小鼠肠黏膜上皮细胞，37℃水浴极速轻柔解冻，严格控制时间≤1分钟，冰晶基本融化即刻取出，杜绝水浴过久损伤细胞膜。消毒冻存管外壁，无菌缓慢转移细胞悬液至预热完全培养基中，极轻柔混匀，保护细胞活性。

步骤三：超低速离心净化 室温190g、8分钟超低速离心，最大程度避免娇嫩上皮细胞破损凋亡。离心后极其缓慢吸弃上清废液，精准保留细胞沉淀，加入预热无菌PBS缓冲液温和重悬，再次离心清洗，彻底去除残留杂质。

步骤四：极低密度接种 吸净PBS废液，加入黏膜上皮专用培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，计数后调整细胞密度至7×10⁴个/mL，极低密度接种可避免细胞挤压损伤、异常凋亡。缓慢晃动培养瓶，使细胞均匀分散贴壁。

步骤五：长时稳定贴壁培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养48小时，全程绝对禁止挪动、开盖扰动。肠黏膜上皮细胞贴壁缓慢、极易凋亡，长时间稳定环境可大幅提升贴壁存活率，维持细胞正常黏膜上皮形态。

步骤六：超轻柔微量换液 培养48小时后首次微量换液，缓慢吸取1/2陈旧培养基，补充等量新鲜预热培养基，不彻底换液，保留原有微环境。后续每96小时半量换液一次，全程轻操作、低频次，最大程度保护细胞存活。

步骤七：低比例谨慎传代细胞融合度达70%时即可传代，PBS超轻柔清洗细胞，超低浓度胰酶消化5分钟，细胞轻微回缩后立即终止消化。温和收集细胞，低速离心重悬，按1:1.5超低比例传代，严控所有操作参数，杜绝细胞损伤凋亡。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。