小鼠肠动脉内皮细胞

小鼠肠动脉内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离C57BL/6小鼠肠动脉内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：小鼠肠动脉内皮细胞

英文名称： Mouse Intestinal Artery Endothelial Cells

组织来源： 肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠肠动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠肠动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 小鼠肠动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠肠动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：内皮细胞无菌准备 提前30分钟紫外消毒超净工作台及所有耗材试剂，校准培养箱参数。肠动脉内皮细胞对无菌环境、营养条件敏感，提前预热内皮细胞专用培养基、无菌PBS、适配胰酶消化液，培养基需提前添加血管生成相关生长因子。操作人员规范无菌操作，杜绝杂菌污染影响内皮细胞增殖与血管形成功能。

步骤二：快速解冻复苏细胞 取出冻存的小鼠肠动脉内皮细胞，37℃水浴快速晃动解冻，1分钟内完成解冻，留存微量冰晶取出。酒精消毒冻存管外壁，无菌转移细胞悬液至含预热完全培养基的离心管中，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，降低毒性损伤，保护内皮细胞活性。

步骤三：离心清洗纯化 室温250g离心5分钟，温和沉降活细胞，分离上清杂质与死细胞碎片。离心后吸弃废液，加入预热无菌PBS缓冲液重悬细胞沉淀，再次同等参数离心清洗，彻底清除残留冻存液与代谢废物，保证内皮细胞纯净。

步骤四：均匀密度接种 吸弃PBS废液，加入内皮细胞专用完全培养基，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液，计数后调整细胞密度至1.1×10⁵个/mL，接种至无菌培养瓶中。十字晃动培养瓶，使细胞均匀贴壁，利于内皮细胞形成单层规整结构。

步骤五：恒温静置贴壁培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，全程稳定环境参数，不扰动培养瓶。肠动脉内皮细胞贴壁速度适中，稳定环境可促进细胞伸展、形成规整的单层内皮结构。

步骤六：常规营养换液 培养24小时后观察细胞贴壁状态，完成首次换液，吸弃陈旧培养基与悬浮死细胞，更换新鲜预热完全培养基。后续每48小时换液一次，及时补充血管内皮生长因子，维持细胞正常增殖与结构稳定性。

步骤七：规律传代扩增 细胞融合度达85%时进行传代操作，PBS清洗细胞2次，加入胰酶消化液消化3分钟，显微镜观察细胞回缩变圆后立即终止消化。吹打收集细胞悬液，离心重悬后按1:3比例传代，持续扩增培养，每日观察内皮细胞单层结构完整性。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。