产品名称 | 小鼠表皮角化细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Mouse Epidermal Keratinized Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3193 |
方法简介 实验室分离的小鼠表皮角化细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠表皮角化细胞经K1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠表皮角化细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠表皮角化细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠可溶性FMS样酪氨酸激酶1(sFlt-1)elisa试剂盒 | NCI-H1869非小细胞肺癌 |
大鼠可溶性凋亡相关因子(sFAS)elisa试剂盒 | 兔膀胱上皮细胞 |
大鼠血清铁蛋白(SF)elisa试剂盒 | 兔结肠平滑肌细胞 |
大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)elisa试剂盒 | 人胰岛β细胞 |
大鼠β半乳糖苷酶(βGAL)elisa试剂盒 | 大鼠回肠细胞IEC-18（种属鉴定） |
大鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)elisa试剂盒 | 人增生乳腺成纤维细胞 |
猪磷酸化母亲DDP同源物2（p-Smad2）elisa试剂盒 | 小鼠原代前脂肪细胞 |
SW1990人胰腺癌细胞专用培养基 | MYORG基因过表达细胞株 |
SJSA-1人骨肉瘤细胞专用培养基 | ADGRG7基因过表达细胞株 |
原代比格犬软骨细胞专用培养基 | ZNF888基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | RPS6KA6基因过表达细胞株 |
人原代脐静脉周细胞专用培养基 | PIK3R6基因过表达细胞株 |
小鼠表皮角化细胞SNU878细胞专用培养基 | EHHADH基因过表达细胞株 |
12Z细胞专用培养基 | COL25A1基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌实验前期筹备 提前30分钟紫外灭菌超净工作台及所有实验耗材、试剂，校准培养箱温度、CO₂浓度与湿度。提前预热表皮角化细胞专用完全培养基、无菌PBS缓冲液、胰蛋白酶消化液，确认试剂无浑浊、污染、过期。操作人员规范无菌操作，手部、器械全程酒精消毒，搭建洁净实验环境。
步骤二：恒温快速解冻复苏 取出液氮冻存的小鼠表皮角化细胞，迅速置于37℃恒温水浴晃动解冻，严格控制解冻时长1分钟内，留存微量冰晶取出。酒精消毒冻存管外壁，无菌将细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀，稀释冻存保护剂，最大程度保留细胞活性。
步骤三：离心纯化清洗细胞 设置离心机室温250g、5分钟离心，使活细胞沉降，分离上清杂质与死细胞碎片。离心后吸弃上层废液，加入预热无菌PBS缓冲液轻柔重悬细胞，再次离心清洗，彻底去除残留冻存液与代谢废弃物，保证细胞纯度达标。
步骤四：精准密度接种 吸净PBS废液，加入角化细胞专用培养基，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液，计数后调整细胞密度至1.1×10⁵个/mL，接种至无菌培养瓶中。轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，利于细胞贴壁增殖、有序角化生长。
步骤五：稳定恒温培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，全程保持环境参数稳定，禁止随意扰动。小鼠表皮角化细胞生长周期稳定，恒温恒湿环境可有效促进细胞贴壁、进入正常增殖分化周期。
步骤六：定时换液养护 培养24小时后观察细胞贴壁状态，完成首次换液，吸弃陈旧培养基，补充新鲜预热完全培养基，去除悬浮死细胞与代谢废物。后续每48小时换液一次，持续维持营养充足、环境洁净，保障细胞正常增殖角化。
步骤七：规律传代培养 细胞融合度达85%-90%时进行传代操作，PBS清洗细胞表面2次，加入胰酶消化液消化3分钟，显微镜观察细胞回缩脱壁后立即终止消化。吹打收集细胞悬液，离心重悬后按1:3比例分瓶传代，持续扩增，定期观察细胞角化形态与生长状态。
