小鼠表皮角化上皮细胞

小鼠表皮角化上皮细胞

基于组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的表皮角化上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：小鼠表皮角化上皮细胞

英文名称： Mouse Epidermal keratinized epithelial Cells

组织来源： 皮肤组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠表皮角化上皮细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠表皮角化上皮细胞经K5免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠表皮角化上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠表皮角化上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：标准化无菌前置准备 提前30分钟开启超净工作台紫外消毒，全面消杀耗材、试剂与操作区域，校准细胞培养箱各项参数。提前预热角化上皮细胞专用培养基、无菌PBS、胰蛋白酶消化液，该细胞增殖活性较强，需保证培养基营养充足、无菌无杂质。操作人员穿戴无菌防护，全程规范无菌操作，杜绝污染。

步骤二：快速解冻细胞复苏 取出冻存的小鼠表皮角化上皮细胞，37℃水浴快速晃动解冻，1分钟内完成解冻，留存微量冰晶即刻取出。酒精消毒冻存管外壁，无菌转移细胞悬液至含预热完全培养基的离心管中，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，降低化学毒性损伤，保证细胞复苏活性。

步骤三：离心清洗去除杂质 室温250g离心5分钟，使活细胞充分沉降，分离上清中的冻存杂质、死细胞碎片。离心后小心吸弃上清废液，加入预热无菌PBS缓冲液重悬细胞沉淀，再次同等参数离心清洗，彻底净化细胞，为后续增殖培养提供纯净细胞样本。

步骤四：定量均匀接种 吸弃PBS废液，加入专用完全培养基，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液，精准计数后调整细胞密度至1.2×10⁵个/mL，接种于无菌培养瓶内。十字晃动培养瓶，使细胞均匀铺满瓶底，避免局部密度过高，保证细胞均匀增殖、角化。

步骤五：恒温静置贴壁培养 将接种后的培养瓶放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，期间保持培养环境稳定，不挪动、不开启培养瓶。表皮角化上皮细胞贴壁速度快，稳定环境可促进细胞快速贴壁、伸展，进入正常增殖周期。

步骤六：常规换液更新营养 培养24小时后完成首次换液，吸除陈旧培养基与悬浮死细胞，更换新鲜预热完全培养基。后续每48小时常规换液一次，及时清除代谢废物，补充细胞增殖、角化所需营养，维持培养基理化性质稳定。

步骤七：高密度传代扩增 细胞融合度达90%时进行传代，该细胞耐受高密度培养，PBS清洗细胞2次，加入胰酶消化液消化2-3分钟，细胞回缩脱壁后立即终止消化。吹打收集细胞悬液，离心重悬后按1:3比例传代扩增，每日观察细胞角化形态，及时排查异常分化与污染情况。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。