兔子宫内膜上皮细胞

兔子宫内膜上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的子宫内膜上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平⁠⁠

产品名称：兔子宫内膜上皮细胞

英文名称： Rabbit Endometrial Epithelial Cells

组织来源： 子宫组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔子宫内膜上皮细胞采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔子宫内膜上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔子宫内膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔子宫内膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：前期无菌预处理 提前30分钟开启超净台紫外消毒，消杀所有实验耗材与操作区域，检查培养箱CO₂浓度、温度、湿度参数是否稳定。操作人员穿戴无菌防护装备，酒精消毒手部与操作台面。将子宫内膜上皮细胞专用培养基、无菌PBS、温和消化液预热备用，该细胞对培养环境敏感度极高，需提前排查所有试剂无杂质、无污染，保证实验条件最优。

步骤二：细胞恒温解冻复苏 取出冻存细胞，放入37℃水浴快速晃动解冻，冰晶基本融化后立即取出，减少细胞暴露室温的时间。消毒冻存管外壁，无菌吸取细胞悬液，转移至含5mL预热完全培养基的离心管中，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，降低毒性损伤，保护子宫内膜上皮细胞的活性与完整性。

步骤三：低速离心净化杂质 设置离心机参数为室温220g、6分钟，低速离心避免娇嫩上皮细胞破损。离心完成后，缓慢吸弃上层废液，保留管底完整细胞沉淀，加入3mL预热无菌PBS缓冲液，温和重悬细胞，再次离心清洗，彻底去除残留冻存液、死细胞碎片与杂质，提升细胞培养纯度。

步骤四：适宜密度接种 吸净PBS废液，加入专用完全培养基，轻柔吹打制成均匀单细胞悬液，计数后调整细胞密度至9×10⁴个/mL，接种至无菌培养瓶中。轻轻十字摇晃培养瓶，使细胞均匀分布，子宫内膜上皮细胞依赖均匀的生长环境维持极性形态，避免局部密度不均导致生长异常。

步骤五：恒温静置培育 将培养瓶平稳放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱，静置培养36小时，全程保持培养环境绝对稳定，禁止随意开启、挪动培养瓶。该细胞贴壁周期长，缓慢贴壁伸展过程中需杜绝环境扰动，保障细胞顺利附着、生长。

步骤六：阶段性换液维护 培养36小时后完成首次换液，轻柔移除旧培养基，补充新鲜预热完全培养基，去除悬浮死细胞与代谢废物。后续每72小时换液一次，严格遵循慢换液、轻操作原则，避免机械冲击损伤贴壁细胞，持续维持培养基营养平衡与无菌状态。

步骤七：可控传代培养 当细胞融合度达到80%时进行传代操作，PBS轻柔清洗细胞表面，加入低浓度胰酶消化液恒温消化4-5分钟，显微镜观察细胞形态变化，细胞回缩变圆后即刻终止消化。温和吹打收集细胞悬液，低速离心重悬，按1:2比例传代扩增，全程严控消化时间，防止消化过度导致细胞损伤、凋亡，定期观察细胞上皮典型形态。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。