产品名称 | 兔子宫颈上皮细胞 | 组织来源 | 子宫组织 |
英文名称 | Rabbit Cervical Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3829 |
方法简介 实验室分离的兔子宫颈上皮细胞采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的tu子宫颈上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔子宫颈上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔子宫颈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠钠;葡萄糖协同转运蛋白1(Sglt1)elisa试剂盒 | LC-2/ad非小细胞肺癌 |
大鼠可溶性鸟苷酸环化酶B1(sGCB1)elisa试剂盒 | 兔胸主动脉平滑肌细胞 |
大鼠分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)elisa试剂盒 | 兔心肌细胞 |
大鼠可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)elisa试剂盒 | 大鼠肺大动脉平滑肌细胞 |
大鼠β2 肾上腺素受体抗体(β2-AR Ab)elisa试剂盒 | 人结直肠腺癌细胞COLO320 (STR鉴定正确) |
大鼠β3肾上腺素受体(β3AR)elisa试剂盒 | 兔腹膜间皮细胞 |
猪磷酸丝氨酸转氨酶（PSAT）elisa试剂盒 | 人原代结肠上皮细胞 |
SW982 [SW-982]人滑膜肉瘤细胞专用培养基 | ERVFRD-1基因过表达细胞株 |
sh-sy5y人神经母瘤细胞专用培养基 | CCR5基因过表达细胞株 |
小鼠原代食管成纤维细胞专用培养基 | CETP基因过表达细胞株 |
大鼠原代肝星状细胞专用培养基 | GAS2L3基因过表达细胞株 |
人原代韧带成纤维细胞专用培养基 | CAPN8基因过表达细胞株 |
兔子宫颈上皮细胞SNU-475细胞专用培养基 | FBXO43基因过表达细胞株 |
小鼠原代肝外胆管上皮细胞专用培养基 | EVI5L基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌实验环境搭建 提前30分钟对超净工作台、生物安全柜进行紫外灭菌，所有无菌耗材、试剂提前放入工作台消毒备用。操作人员严格执行无菌操作规范，全身无菌防护，手部酒精消杀。将上皮细胞专用培养基、PBS缓冲液、温和消化液预热至37℃，子宫颈上皮细胞较为娇嫩，抗逆性弱，需全程保证试剂无菌、环境洁净，杜绝任何污染风险。
步骤二：细胞温和解冻复苏 取出冻存细胞，37℃水浴快速轻柔解冻，保留微量冰晶即刻取出，避免水浴过久损伤上皮细胞膜结构。冻存管外壁酒精消毒后，无菌转移细胞悬液至含预热完全培养基的离心管中，缓慢轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，减少化学毒性对娇嫩上皮细胞的损伤。
步骤三：低速离心纯化处理 采用室温220g低速离心6分钟，相较于成纤维细胞，上皮细胞更脆弱，降低离心转速与延长时间，可避免细胞挤压破损。离心后轻柔吸弃上清废液，加入预热无菌PBS缓冲液温和重悬细胞，再次低速离心清洗，彻底清除残留杂质，最大程度保留活细胞活性。
步骤四：低密精准接种 吸弃PBS废液，加入上皮细胞专用完全培养基，轻柔吹打制备单细胞悬液，计数后调整细胞密度至8×10⁴个/mL，低密度接种可避免上皮细胞密度过高导致分化异常。将细胞悬液接种至培养瓶，缓慢晃动铺匀，保证细胞分散均匀，为细胞贴壁、极性生长提供充足空间。
步骤五：稳定恒温贴壁培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂、饱和湿度培养箱静置培养，前36小时禁止挪动培养瓶，兔子宫颈上皮细胞贴壁速度较慢，需要更长静置时间完成贴壁伸展。全程稳定培养环境参数，避免温度、CO₂浓度波动导致细胞贴壁失败、凋亡。
步骤六：精细化换液养护 培养36小时后观察细胞贴壁状态，轻柔吸弃旧培养基，避免触碰贴壁细胞，缓慢加入新鲜预热完全培养基。后续每72小时换液一次，上皮细胞代谢速率较慢，无需频繁换液，同时换液操作全程轻柔，防止机械力损伤细胞，维持细胞正常形态与生长活性。
步骤七：谨慎传代扩增 细胞融合度达75%-80%时进行传代，PBS轻柔清洗细胞2次，使用低浓度胰蛋白酶温和消化4分钟，显微镜观察细胞完全回缩脱壁趋势后，立即加培养基终止消化。轻柔吹打收集细胞，低速离心重悬，按1:2低比例传代，上皮细胞增殖能力有限，严禁高密度传代，定期观察细胞上皮形态，杜绝细胞去分化。
