兔椎间盘髓核细胞

兔椎间盘髓核细胞

运用胶原酶消化法从新西兰大白兔椎间盘髓核细胞组织中分离目标细胞群体，经 Percoll 梯度离心纯化后接种于纤连蛋白包被培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术和免疫荧光双重分析表面标志物表达谱，结合功能实验验证细胞生物学特性。

产品名称：兔椎间盘髓核细胞

英文名称： Rabbit Nucleus Pulposus Cells

组织来源： 椎间盘组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔椎间盘髓核细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔椎间盘髓核细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔椎间盘髓核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每3-4天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔椎间盘髓核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔椎间盘髓核细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，仅剩微小冰晶时取出冻存管，75% 酒精擦拭管壁，移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢加入髓核细胞专用完全培养基的离心管。

2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸弃上层冻存上清液，髓核原代细胞沉淀松散，吸上清操作尽量靠近液面。

3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔椎间盘髓核细胞完全培养基，低力度反复吹打管底沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，髓核细胞比较脆弱，严禁暴力吹打。

4. 计数接种培养器皿：完成活细胞计数，按照髓核细胞适宜接种密度接种培养瓶，接种后十字轻晃培养瓶，细胞均匀铺于瓶底。

5. 培养箱静置贴壁孵育：将培养瓶平稳放置 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，尽量减少开启培养箱，保障髓核细胞贴壁。

6. 初次换液清除悬浮碎片：24h 后显微镜镜检贴壁状态，弃除旧培养基，清除悬浮死细胞与碎片，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。

7. 扩增培养传代实验：每 2‑3 天更换新鲜完全培养基，监控细胞形态，汇合度达到 80% 左右进行传代，用于椎间盘退变相关体外模型构建。

1.取材时需尽量去除脂肪组织和坏死组织，将目标组织剪成1-2mm3小块后用酶消化法或组织块法进行原代培养。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。